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Biotecnologia Aplicada
Elfos Scientiae
ISSN: 0684-4551
Vol. 17, No. 1, 2000, pp. 35-38
Bioline Code: ba00008
Full paper language: English
Document type: Research Article
Document available free of charge

Biotecnologia Aplicada, Vol. 17, No. 1, 2000, pp. 35-38

 es Polimerización Lineal de un Péptido Sintético de la Región V3 del Aislamiento JY1 del VIH-1, Mediante Residuos de Cisteína Protegidos con Acetamidometilo en el Grupo Tiol
Cruz, Luis J.; Iglesias, Enrique; Garay, Hilda E.; Besada, Vladimir & Reyes, Osvaldo

Resumen

Se desarrolló un método para realizar la polimerización lineal de un péptido sintético protegido temporalmente con acetamidometilo (Acm) en los grupos tiol de las cisteínas. El polímero obtenido fue capaz de mejorar la inmunogenicidad de los monómeros del péptido. Para lograr la polimerización, se incorporaron dos residuos de Cys(Acm) en ambos extremos del péptido. El péptido modelo contiene epitopos B y T situados consecutivamente. El epitopo B comprende 15 aminoácidos de la región V3 del aislamiento JY1 del VIH-1 y el epitopo T pertenece a la región 830-844 del toxoide tetánico. La reacción de polimerización consistió en la desprotección y oxidación instantánea de los grupos tiol a altas concentraciones del monómero. Esta reacción procedió aproximadamente con 80% de conversión. El monómero y el polímero fueron analizados por cromatografía de filtración en gel, cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa, electroforesis desnaturalizante en geles de poliacrilamida y espectrometría de masas. Los sueros obtenidos de los ratones inmunizados con el monómero y el polímero, fueron ensayados contra un conjugado BSA-péptido JY1 en un ELISA indirecto. Los valores de los títulos más altos correspondieron a la inmunización con el polímero (p < 0,01). Estos resultados confirman que la estrategia de polimerización lineal con Cys(Acm), puede ser utilizada para aumentar la inmunogenicidad de los péptidos sintéticos en vacunas o en preparados terapéuticos.

Palabras-clave
polímeros de péptidos por cisteínas, síntesis en fase sólida, vacunas de péptidos

 
 en Linear Polymerization of a Synthetic Peptide of the V3 Region from HIV-1 JY1 Isolate Using Acetamidomethyl-protected Thiol Groups of Cysteine Residues
Cruz, Luis J.; Iglesias, Enrique; Garay, Hilda E.; Besada, Vladimir & Reyes, Osvaldo

Abstract

A method to carry out the linear polymerization of a synthetic peptide using acetamidomethyl (Acm)-protected thiol groups of cysteine residues, was developed. This polymer showed to be useful in the improvement of peptide immunogenicity. To achieve the polymerization, two Cys(Acm) residues were incorporated at both ends of the peptide. The model peptide contains B and T cell epitopes placed in tandem. The B cell epitope comprises 15 amino acids of the V3 region from HIV-1 JY1 isolate, and the helper T cell epitope belongs to the region 830-844 of the tetanus toxoid. The polymerization reaction consisted in an instant process of deprotection and oxidation of thiol groups at a high monomer concentration. This reaction proceeded quickly with about 80% of conversion. The monomer and the polymers were analyzed by gel filtration chromatography, reverse phase-high performance liquid chromatography, sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, and mass spectrometry. The sera obtained from mice immunized with the monomer and the polymer variants were assayed against a conjugated BSA-JY1 peptide in an indirect ELISA. The highest titer values corresponded to the polymer variant (p < 0.01). This result emphasizes that this strategy can be used to increase the immunogenicity of synthetic peptides in vaccines or therapeutics.

Keywords
cysteine peptide polymers, solid phase synthesis, vaccine peptide

 
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