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Purificación de la Proteína Recombinante TmpA de Treponema pallidum Mediante Cromatografía de Afinidad por Iones Metálicos y Su Uso en el Diagnóstico Serológico de la Sífilis Izquierdo, Maricela; Silva, Eladio; Díaz, Héctor; Lubián, Ana L.; Nibot, Carmen & Tabares, Dolores Resumen En la cepa W3110 de Escherichia coli se obtuvieron dos variantes de la proteína de membrana de Treponema pallidum (TmpA-His y TmpA). La TmpA-His fue clonada en un vector que adiciona una secuencia que codifica una cola de seis histidinas en el extremo carboxilo, y su purificación se realizó mediante cromatografía de afinidad por iones metálicos inmovilizados (IMAC, según sus siglas en inglés). Se empleó la matriz Sepharose 4B-IDA y los iones metálicos Ni 2+ y Cu 2+ como ligandos. Esta cromatografía rápida y de un solo paso, permitió aumentar el grado de pureza inicial de la TmpA-His de 20% hasta 90%. El rendimiento final fue de 70% y la capacidad de carga de la matriz fue de 1 mg/mL. La TmpA se purificó mediante la técnica de electroelución y su recobrado fue de 1 mg por cada corrida cromatográfica. El uso de ambas proteínas en el diagnóstico de la sífilis, se evaluó mediante un ensayo ELISA con el uso de un panel de sueros positivos y negativos. No se encontraron diferencias en relación con el comportamiento serológico de ambos antígenos, lo que sugiere el uso potencial de la TmpA-His en el desarrollo de sistemas diagnósticos para la detección de la sífilis. Palabras-clave cromatografía de afinidad, diagnóstico, IMAC, sífilis, TmpA

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Purification of the Recombinant Protein TmpA from Treponema pallidum Using Immobilized Metal Ion Affinity Chromatography, and Its Use in the Serodiagnosis of Syphilis Izquierdo, Maricela; Silva, Eladio; Díaz, Héctor; Lubián, Ana L.; Nibot, Carmen & Tabares, Dolores Abstract Two variants of the Treponema pallidum membrane protein A (TmpA-His, and TmpA) were expressed in Escherichia coli W3110 strain. TmpA-His was cloned with a six histidine tag at the C-terminus and was purified by immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC). For this purpose, Sepharose 4B-IDA was used as matrix, and Ni 2+ and Cu2+ as chelating metal ions. Using this rapid and single-step chromatography the initial 20% purity of TmpA-His reached 90%. The overall yield was 70% and the binding capacity of the matrix for TmpA-His was approximately 1 mg/mL. TmpA was purified by electroelution and the yield was estimated to be 1 mg per each electroelution. The use of both proteins in the diagnosis of syphilis was evaluated by ELISA using panels of positive and negative sera. With respect to the serologic performance no differences between both proteins were found, which suggests the potential use of TmpA-His in the development of diagnostic systems for syphilis serodiagnosis. Keywords affinity chromatography, diagnosis, IMAC, syphilis, TmpA

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