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Reduction in the Time of IgG2b Purification by Protein A Affinity Chromatography Padilla, Sigifredo; Tamayo, Andrés; Socorro, Enio; Pierrat, Ricard; Marrero, Aniebris; Álvarez, Tatiana; Montero, José A.; García, Janet; Pérez, Maité; Sosa, Raudel; Ibarra, Neysi & Valdés, Rodolfo Abstract During the purification step of the recombinant hepatitis B surface antigen (HBsAg), CB.Hep-1 (IgG2b) monoclonal antibody (MAb) immunosorbents are used. The increasing need of a vaccine led to the scaling up and optimization of MAb production step. The aim of this work was to modify the performance conditions of the protein A sepharse-4 Fast Flow (PASFF) affinity chromatography. Consequently, binding buffer (phosphate-buffered saline) and elution buffer (decreasing pH gradient from 0.1 M citric acid pH 5 to pH 3), were replaced by 0.1 M citric acid pH 5 (where contaminants and other IgG elute isocratically) and elution of IgG2b with 0.1 M citric acid pH 3. This change allowed us to obtain a molecule with a high purity degree (> 90%) and a 30% reduction in performance time. The yield is the same as in the current method. Keywords HbsAg, IgG2b, IgG2b to HBsAg, monoclonal antibodies, protein A, purification

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Reducción del Tiempo de Purificación de la IgG2b Mediante Cromatografía de Afinidad por Proteína A Padilla, Sigifredo; Tamayo, Andrés; Socorro, Enio; Pierrat, Ricard; Marrero, Aniebris; Álvarez, Tatiana; Montero, José A.; García, Janet; Pérez, Maité; Sosa, Raudel; Ibarra, Neysi & Valdés, Rodolfo Resumen Durante el proceso de purificación de la forma recombinante del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (AgsHBr), se utilizan inmunoadsorbentes que tienen el anticuerpo monoclonal (AcM) CB.Hep-1 (IgG2b) como ligando. La demanda creciente de una vacuna condujo al escalado y optimización del proceso de producción de este AcM. Este trabajo tuvo como objetivo variar las condiciones de la cromatografía de afinidad por proteína A-sefarosa 4 de alto flujo. La aplicación de la muestra en tampón fosfato salino a pH 8 y la elución del AcM de interés mediante un gradiente decreciente de pH paso a paso desde ácido cítrico 0,1 M pH 5 hasta ácido cítrico 0,1 M pH 3, se sustituyó por la aplicación de la muestra en ácido cítrico 0,1 M pH 5 . los contaminantes eluyen isocráticamente. y la posterior elución del AcM (IgG2b) con ácido cítrico 0,1 M pH 3. La aplicación de este procedimiento permite obtener una molécula de AcM con alto grado de pureza (> 90%) y disminuir en 30% el tiempo de duración de la cromatografía. De esta forma, se obtiene el mismo recobrado que con el método que se emplea actualmente. Palabras-clave AgsHB, anticuerpos monoclonales, IgG2b, IgG2b contra AgsHB, proteína A, purificación

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