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Biotecnologia Aplicada
Elfos Scientiae
ISSN: 0684-4551
Vol. 17, No. 3, 2000, pp. 177-182
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Bioline Code: ba00052
Full paper language: English
Document type: Research Article
Document available free of charge
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Biotecnologia Aplicada, Vol. 17, No. 3, 2000, pp. 177-182
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Isolation and Structure-functional Characterization of Human Colostral Lactoferrin
Aguila La O., Antonio; Puerta, Ana G. Herrera; Velázquez, William Toledo; Alfonso, Armando Rodríguez; Sánchez, Hilda García; Machín, Janhna Hernández; Lahens, Armando Cádiz; González, Gustavo Sierra & Brock, Jeremy Hugh
Abstract
Human lactoferrin has been the focus of extensive research because of its antimicrobial, ferrochelating, immunomodulatory, and diagnostic potentialities. To meet the need for homogenous lactoferrin preparations, here we report simple procedures for colostrum processing, chromatographic isolation, and quality control techniques for the evaluation of the most relevant structure-functional properties of lactoferrin. Purity and identity were determined by combination of electrophoretic, densitometric, and immunochemical techniques. Structural integrity was assayed by high-performance liquid chromatography (HPLC), and iron-chelating properties were evaluated by spectroscopic analysis of lactoferrin derivatives. Antimicrobial activity was tested in vitro against Vibrio cholerae
C7258, a regional epidemic strain. These procedures allowed the isolation and characterization of substantially pure (98-99%), structurally intact (92-93%), non-toxic, lipopolysaccharide (LPS)-free (less than 0.40 EU/mg of protein), low-iron saturated (below 7% saturation), biologically active (2.50 M lactoferrin inhibited V. cholerae growth in 50%), and consistently homogenous preparations. The quality of this lactoferrin preparation allows its use in basic studies of the mechanisms of microbial virulence, and in the development of new tools for the diagnosis of gastrointestinal inflammation which are currently being performed by our group.
Keywords
antibacterial activity, human colostrum, iron, lactoferrin, LPS, protein purification, Vibrio cholerae
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Purificación y Caracterización Estructural y Funcional de la Lactoferrina de Calostro Humano
Aguila La O., Antonio; Puerta, Ana G. Herrera; Velázquez, William Toledo; Alfonso, Armando Rodríguez; Sánchez, Hilda García; Machín, Janhna Hernández; Lahens, Armando Cádiz; González, Gustavo Sierra & Brock, Jeremy Hugh
Resumen
La lactoferrina humana ha sido intensamente investigada por su potencial antimicrobiano, ferroquelante, inmunomodulador y para el diagnóstico. Dada la necesidad de preparaciones homogéneas de lactoferrina, en este trabajo se reportan procedimientos simples para el procesamiento del calostro y su aislamiento cromatográfico, y técnicas de control de calidad de sus propiedades estructurales y funcionales. La pureza e identidad fueron determinadas mediante técnicas electroforéticas, densitométricas e inmunoquímicas. La integridad estructural se evaluó por cromatografía líquida de alta presión (HPLC), y las propiedades ferroquelantes se evaluaron por análisis espectroscópico de sus derivados. La actividad antimicrobiana se evaluó in vitro contra Vibrio cholerae
C7258, una cepa epidémica regional. Estos procedimientos permitieron la purificación y caracterización de preparaciones homogéneas de lactoferrina de alta pureza (98-99%), estructuralmente íntegra (92-93%), no tóxica, sin lipopolisacáridos (LPS) (menos de 0,4 EU/mg de proteína), con baja saturación de hierro (menos de 7% de saturación) y biológicamente activa (2,5 μM de lactoferrina inhibió el crecimiento in vitro de V. cholerae en 50%). La alta calidad de esta preparación de lactoferrina permite su empleo en estudios básicos de los mecanismos de acción bacteriana y en el desarrollo de nuevos medios para el diagnóstico de inflamaciones gastrointestinales, en los cuales se encuentra enfrascado nuestro grupo en estos momentos.
Palabras-clave
actividad antibacteriana, calostro humano, hierro, lactoferrina, LPS, purificación de proteínas, Vibrio cholerae
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