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Obtaining Biologically Active IL-15 in Escherichia coli Santos, Alicia; Morera, Yanelys; Araña, Manuel J.; Ferrero, Joel; Moro, Alejandro; García, José; Sanz, Eva; de la Hera, Antonio & Perea, Silvio Abstract Interleukin-15 (IL-15) is a recently discovered cytokine that shares with interleukin-2 (IL-2) the beta and gamma subunits of the receptor complex, therefore, both of them display similar biological effects. Moreover, IL-15 induces B and T cell proliferation, natural killer cell cytolytic activity and cytokine generation as well as protects T cell from apoptosis. The IL-15 synthesis and secretion are controlled both at transcriptional and post-transcriptional levels. This fine regulation poses a serious difficulty for its expression in eukaryotic systems. Here, the cDNA of human IL-15 was cloned into a prokaryotic vector under control of the tryptophan promoter for its expression in Escherichia coli . The recombinant IL-15 was obtained as an insoluble product, which represented 10% of the total protein. An extraction step in 8 M urea followed by a renaturalization process by diluting urea to 0.08 M was performed. The biological activity of this protein was 2.3 x 105 IU/mg in a CTLL-2 proliferation assay. The IL-15 proliferative activity on these cells was neutralized by a monoclonal antibody specific to IL-15, showing that the displayed activity was dependent on this cytokine. These simple and fast procedures allowed us to obtain a recombinant human IL-15 in E. coli, making this cytokine easily available for in vitro and therapeutic studies. Keywords cytokine, eukaryotic system, expression, IL-15, recombinant E. coli

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Obtención de IL-15 Biológicamente Activa en Escherichia coli Santos, Alicia; Morera, Yanelys; Araña, Manuel J.; Ferrero, Joel; Moro, Alejandro; García, José; Sanz, Eva; de la Hera, Antonio & Perea, Silvio Resumen La interleucina-15 (IL-15) es una citocina descrita recientemente que comparte con la IL-2 las subunidades beta y gamma del complejo receptor, y muestra muchos de los efectos biológicos descritos para la IL-2. La IL-15 induce la proliferación de células T, la maduración de células B, la citotoxicidad por células NK y la generación de citocinas, además de proteger a las células T de la apoptosis. La síntesis y secreción de la IL-15 es controlada a nivel transcripcional y post-transcripcional. Esta fuerte regulación representa una dificultad para su obtención biotecnológica en sistemas eucariontes. En este trabajo el ADNc de IL-15 humana fue clonado en un vector para su expresión en Escherichia coli bajo el control del promotor triptófano. La proteína fue expresada en forma insoluble y representó el 10% de la proteína total. Se realizó un proceso de extracción con 8 M de urea y de renaturalización por dilución hasta 0.08 M de urea. En el ensayo de proliferación con la línea celular CTLL-2 dependiente de citocinas, la proteína renaturalizada mostró una actividad específica de 2,3 x 105 UI/mg. La actividad proliferativa sobre estas células fue neutralizada mediante el uso de un anticuerpo monoclonal específico contra IL-15, muestra de que la actividad obtenida es dependiente de esta citocina. La obtención de la IL-15 humana recombinante en E. coli por un procedimiento sencillo permite disponer de esta citocina tanto para estudios in vitro como para su uso terapéutico. Palabras-clave citocina, E. coli recombinante, expresión, IL-15, sistema eucarionte

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