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Transfección de Piel Intacta y Lesionada Mediante el Uso de un Complejo ADN/Polietilenimina Berlanga, Jorge; Sáez, Vivian; Santana, Elaine; Riego, Eileen; Lleonart, Ricardo & Castro, Fidel O. Resumen El fácil acceso al tejido cutáneo permite su fácil manipulación genética y la corrección de trastornos locales o sistémicos mediante la transferencia exógena del material genético apropiado. Aunque de forma limitada, la polietilenimina (PEI) ha sido ensayada exitosamente como vector de ADN en modelos in vitro e in vivo. En este trabajo se estudió la transfección potencial de células de piel, tras una inyección intracutánea del plasmidio reportero combinado con PEI en ratas y cerdos. Se estudió, además, el efecto de la administración tópica de un ungüento experimental que sirve de vehículo al complejo ADN/PEI en la transfección de células cutáneas, sobre tejido intacto y herido. Una sola inyección intracutánea permitió la transfección de la células epidérmicas en ambas especies, y de estructuras de la dermis profunda en ratas. La aplicación del ungüento facilitó la transfección de la piel intacta y de los queratinocitos de los bordes de las heridas en los cerdos. Aunque no se descarta la integración cromosómica, la presencia del plasmidio y su expresión en la piel de las ratas decrecen progresivamente a los 30 días de su inyección o aplicación tópica. Se ejecutarán otros experimentos para definir la factibilidad de acelerar la cicatrización mediante la transfección cutánea con factores de crecimiento. Palabras-clave ADN, PEI, piel, transfección

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Transfection of Intact and Wounded Skin with a DNA/Polyethylenimine Complex Berlanga, Jorge; Sáez, Vivian; Santana, Elaine; Riego, Eileen; Lleonart, Ricardo & Castro, Fidel O. Abstract Cutaneous cells offer unique advantages to correct local or systemic disorders via in vivo or ex vivo gene transfer techniques. Polyethyleneimine (PEI) is emerging as a highly efficient vector for DNA delivery both in vitro and in vivo. We investigated whether a single intracutaneous injection of a DNA reporter plasmid in complex with PEI, allowed the transfection of intact skin in rats and pigs. The ability of an experimental ointment to deliver to and transfect intact or wounded skin areas, was also examined. We demonstrated that a single intracutaneous injection of the complex allowed the transfection of epidermal cells in both species. A single topic administration of the ointment showed to transfect intact skin areas and keratinocytes at the edges of controlled wounds in pigs. Though integration is not excluded, plasmid dose and its expression intensity appeared progressively reduced in rats. skin, after 30 days of injection or topic administration. These data are the core for additional studies to elucidate the feasibility of using a growth factor-based gene therapy to stimulate wound healing. Keywords DNA, PEI, skin, transfection

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