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Transferencia de Genes en Camarón ( Litopenaeus schmitti ) Mediante la Electroporación de Embriones Unicelulares y la Inyección de ADN Desnudo en Músculo de Adultos. Arenal, Amílcar; Pimentel, Rafael; Guimarais, Mayrene; Rodríguez, Armando; Martínez, Rebeca & Abad, Zoila Resumen La manipulación genética de camarones es de interés para estudios biológicos y aplicaciones biotecnológicas. Para llevar a cabo los experimentos de transferencia de genes es necesario diseñar y evaluar genes quiméricos, y se deben establecer los protocolos para transferir estos genes. Se evaluaron los promotores de b-actina de carpa, así como los promotores tempranos de CMV y SV40, en relación con la expresión del gen reportero lacZ de Escherichia coli . En el presente trabajo se ensayó la electroporación de embriones de camarón y se encontró que las condiciones óptimas fueron 12 kV durante 6 s en PBS 4X. Se detectó actividad transitoria de la b-galactosidasa en 19,4% de los embriones de camarón electroporados en estadio de una célula, y en músculo de camarones adultos inyectados con ADN desnudo. Los resultados demostraron que es posible transferir ADN desnudo a tejidos de camarón. El promotor de b-actina de carpa y los promotores tempranos de CMV y SV40, junto al gen lacZ de E. coli, demostraron ser funcionales en tejidos de camarón ( Litopenaeus schmitti ). El gen lacZ de E. coli es considerado un reportero satisfactorio para realizar estudios de expresión transitoria en camarones, tanto en embriones como en tejidos adultos. Palabras-clave camarón, electroporación, Litopenaeus, transgénico, reportero

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Gene Transfer in Shrimp ( Litopenaeus schmitti ) by Electroporation of Single-cell Embryos and Injection of Naked DNA into Adult Muscle Arenal, Amílcar; Pimentel, Rafael; Guimarais, Mayrene; Rodríguez, Armando; Martínez, Rebeca & Abad, Zoila Abstract The genetic manipulation of shrimp is of interest for biological studies and biotechnological applications. In order to perform gene transfer experiments, chimeric genes must be designed and tested, and efficient gene transfer protocols must be established. The carp b-actin, CMV and SV40 early promoters were tested to drive the Escherichia coli lacZ reporter gene in shrimp. Electroporation of single-cell shrimp (Litopenaeus schmitti) embryos was assayed and the optimal conditions were found with a pulse amplitude of 12 kV for 6 s in 4X PBS. Transient b-galactosidase activity was detected in 19.4% of shrimp embryos after electroporation at the single-cell embryo stage and in adult muscles after naked DNA injection. The naked DNA transference to shrimp tissue was demonstrated. The functionality analysis of carp b-actin, CMV and SV40 early promoters, together with the E. coli lacZ gene, demonstrated that all three promoters are active in shrimp. The E. coli lacZ gene is considered as a useful reporter gene for transient expression studies in shrimp embryos and adult tissues. Keywords electroporation, Litopenaeus, reporter, transgenic, shrimp

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