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Biotecnologia Aplicada
Elfos Scientiae
ISSN: 0684-4551
Vol. 18, No. 1, 2001, pp. 29-31
Bioline Code: ba01006
Full paper language: English
Document type: Research Article
Document available free of charge

Biotecnologia Aplicada, Vol. 18, No. 1, 2001, pp. 29-31

 es Comparación de dos Métodos de Micropurificación de ADN Para Clonación
Hardy, Eugenio; Silva, Ricardo; Pupo, Elder; Hermida, Lisset; Coizeau, Edelgis; Niebla, Olivia & Castellanos-Serra, Lila

Resumen

Recientemente se describió un método para la recuperación de ácidos nucléicos separados en geles de poliacrilamida, el cual se basa en la detección sensible de ADN en el gel mediante zinc-imidazol seguido de la elución pasiva del mismo desde micropartículas de gel de 32 mm de tamaño promedio hacia el tampón de elución. En este trabajo se evalúa la racionalidad del uso preferencial de ADN micropurificado mediante este método, en comparación con el uso de ADN obtenido por un método convencional basado en la electroforesis en geles de agarosa seguida por la tinción con bromuro de etidio y su visualización con luz ultravioleta. Se encontró que la micropurificación de dos fragmentos de ADN, uno de 1,2 kpb que codifica el gen de resistencia a la kanamicina y el vector pUC19, mediante ambos métodos produjo el mismo - estadísticamente indistinguible (P = 0,10) -, número de colonias cuando éstos se utilizaron para transformar células competentes de Escherichia coli check for this species in other resources XL-1 Blue. Sin embargo, el número de transformantes obtenidos en ausencia del inserto fue significativamente menor cuando el vector de ADN fue micropurificado del gel de acrilamida mediante el método zinc-imidazol (P = 0,0002), lo que aumentó la probabilidad de encontrar colonias recombinantes en el experimento de clonación. Estos resultados estimularon el uso de la técnica basada en la tinción con zinc-imidazol para la micropurificación de ADN de alta calidad y para resolver las situaciones donde el ADN micropurificado convencionalmente de geles de agarosa (ej., genes de la proteína de membrana externa de clase 1 intacta o modificada en el lazo 5, y la proteína Opc de la cepa 866 de Neisseria meningitidis check for this species in other resources ), falla en la generación de células recombinantes de E. coli.

Palabras-clave
bromuro de etidio, clonación, electroforesis en gel, luz ultravioleta, tinción con zinc

 
 en Comparison of Two Gel Electrophoresis-based DNA Micropurification Methods for Molecular Cloning
Hardy, Eugenio; Silva, Ricardo; Pupo, Elder; Hermida, Lisset; Coizeau, Edelgis; Niebla, Olivia & Castellanos-Serra, Lila

Abstract

We recently described a method for recovering nucleic acids separated from polyacrylamide gels, which is based on the sensitive on-gel DNA detection with zinc-imidazole followed by passive elution from 32-mm average-size gel microparticles into the elution buffer. The rationale for the preferential use of DNA micropurified by this method, as compared to DNA obtained by a conventional methodbased on electrophoresis on agarose gels followed by ethidium bromide staining and UV light visualizationwas evaluated. We found that micropurification of two DNA fragments, a 1.2 kbp DNA encoding the kanamycine resistant gene and the pUC19 vector, by both methods produced the same, statistically undistinguishable (P = 0.10)number of colonies when used to transform Escherichia coli check for this species in other resources XL-1 Blue competent cells. However, the number of transformants obtained in the absence of the insert was significantly lower when the DNA vector was micropurified from the polyacrylamide gel by the zinc-imidazole method (P = 0.0002), which increased the probability of finding desired recombinant colonies in the cloning experiment. These results encouraged the use of our zinc-imidazolebased technique for high quality micropurification of DNA and to overcome situations where DNA purified from conventional LGT agarose (e.g., genes for the class 1 outer membrane proteinboth intact or with a deletion in loop 5and Opc-protein from Neisseria meningitidis check for this species in other resources 866 strain) failed to give rise to recombinant E. coli cells.

Keywords
cloning, ethidium bromide, gel electrophoresis, ultraviolet-light, zinc staining

 
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