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Reyes, Osvaldo; Figueroa, Ignacio; Garay, Hilda E.; Gonzalez, Luis J. & Cruz, Luis J. Abstract Modified peptides with some fluorophores have been widely used in molecular biology. To modify a peptide with fluorescein, the coupling is achieved with some derivatives, such as 5- fluorescein isothiocyanate, 4-(iodoacetamido) fluorescein, 5- carboxyfluorescein succinimidyl ester, etc. Nevertheless, the labeling with fluorescein in solid phase is not reported.In this paper the labeling of a peptide with fluorescein, using TBTU strategy in solid phase is presented. The labeled peptide is applied to the protease contaminant determination. In this case we used tripsin as model enzyme. Different protease solutions were incubated four hours with 3 mg of labeled peptide. The analysis was performed by 0.8 % agarose gel electrophoresis in five minutes of run time and 10 pg of protease were detected. Keywords peptide synthesis, solid phase synthesis, fluorescein, modified peptides, protease contaminant determination

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Sintesis en fase solida de un peptido fluoresceinado para la determinacion cualitativa de proteasas Reyes, Osvaldo; Figueroa, Ignacio; Garay, Hilda E.; Gonzalez, Luis J. & Cruz, Luis J. Resumen Los peptidos derivatizados con agentes fluoroforos han encontrado un amplio uso en los metodos de la biologia molecular. Para modificar un peptido con fluoresceina, el acoplamiento a la secuencia peptidica se rea-liza generalmente en solucion con derivados de esta sustancia, como son: el 5- isotiocianato de fluoresceina, la 4-iodoacetamidofluoresceina, el 5-succinimidil ester de carboxifluoresceina, entre otros. Sin embargo, no se ha reportado el marcaje con este fluoroforo utilizando las estrategias de acoplamiento de la sintesis en fase solida. En este trabajo se presenta la derivatizacion de un peptido con fluoresceina libre mediante la estrategia de activacion con TBTU en fase solida. El peptido marcado se aplica a la determinacion de bajos niveles de actividad proteolitica en una muestra de tripsina. Diferentes cantidades de tripsina se incubaron con 3 mg del peptido marcado durante cuatro horas. El analisis se realizo por electroforesis en un gel de agarosa 0,8 % con cinco minutos de corrida y se detectaron 10 pg de la proteasa. Palabras-clave sintesis de peptidos, sintesis en fase solida, fluoresceina, peptidos modificados, determinacion de proteasas contaminantes

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