Biotecnología Aplicada 1998;15:154-158
Síntesis de un nuevo fosforamidito nucleosídico biotinilado
para la preparación de oligonucleótidos multibiotinilados
José Ángel Silva, Víctor Jiménez y Magalys
Campos
Code Number: BA98023
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ABSTRACT
Here, we report the chemical synthesis of a biotinylated nucleoside
(2'-deoxyadenosine) at C-8 position, using the 1,2-bis-(aminoethoxy)ethane
as a polar spacer. This compound is compatible with automatic
oligonucleotide synthesis by phosphoramidite method and allows the
site-specific polybiotinylation of the oligonucleotides with a coupling
efficiency higher than 98 %. We report the immunoenzymatic recognition of
these oligonucleotides immobilized on membrane by the dot-blot technique.
We detected 1.6 fmol of target DNA using this oligonucleotides as a probe
in a membrane hybridization assay.
Key words: biotin, 2'-deoxyadenosine, phosphoramidite method,
oligonucleotides
RESUMEN
Se reporta la síntesis química de un nucleósido
(2'-desoxiadenosina) biotinilado en la posición C-8 y con un
espaciador de cadena polar [1,2-bis-(aminoetoxi) etano], para ser utilizado
en la preparación de oligonucleótidos multibiotinilados
mediante reacción en fase sólida. Este compuesto es
compatible con la síntesis automática por el método
del fosforamidito y permite la multibiotinilación sitio
específica de los oligonucleótidos, con una eficiencia de
acoplamiento superior al 98 %. Se muestra el reconocimiento de estos
oligonucleótidos inmovilizados en membrana por la técnica de
dot-blot y un ensayo de hibridación en membrana donde se utiliza
como sonda un oligonucleótido biotinilado por esta técnica y
en el que se detectan 1,6 fmol de ADN blanco inmovilizado.
Palabras claves: biotina, 2'-desoxiadenosina, método del
fosforamidito, oligonucleótidos
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