Biotecnología Aplicada 1998;15:173-175
A single-step screening procedure for Pichia pastoris clones, by
PCR
Camilo Ayra-Pardo, Ciro García Martínez and Gustavo A
de la Riva
Code Number: BA98027
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ABSTRACT
The screening of Pichia pastoris transformants is always
necessary to avoid any possible selection of "false" transformants
resulting from a gene conversion event between the transforming vector his4
gene and the mutant his4 locus in the Pichia genome. True
transformants can be identified by conventional Southern blot or by
polymerase chain reaction (PCR) analysis of purified genomic DNA, although
both methods have the disadvantage of being time-consuming and the number
of clones that can be simultaneously screened is limited. In this report,
we describe a faster method for the screening of P. pastoris clones,
using a single-step PCR procedure from fresh-intact colonies.
Key words: PCR, Pichia pastoris, methylotrophic
yeast, AOX1
RESUMEN
El análisis de transformantes de Pichia pastoris es
siempre necesario para eliminar la selección de "falsos" positivos
resultantes del evento de conversión génica entre el gen
his4 del vector de transformación y el locus his4 en
el genoma de Pichia. Los transformantes positivos pueden ser
identificados por técnicas convencionales como Southern blot o
reacción en cadena de la polimerasa (RCP), a partir de ADN
genómico purificado. No obstante, ambos métodos tienen la
desventaja de ser procedimientos de larga duración y de permitir el
análisis de un número limitado de clones
simultáneamente. En este reporte describimos un método de
pesquisaje en un solo paso de clones de P. pastoris mediante RCP de
colonias frescas intactas.
Palabras claves: RCP, Pichia pastoris, levadura
metilotrófica, AOX1
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