Biotecnología Aplicada 1998;15:247-249
Electroporation of Neisseria meningitidis with
plasmid DNA
Santiago Dueñas, Rolando Pajón, Maité
Delgado, Erick C
Nogueiras, Alejandro Martín
Code Number: BA98040
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ABSTRACT
In this paper we describe an electroporation
protocol for
Neisseria meningitidis. Plasmid vectors up to 12.5 kb,
containing a selection marker,
flanked by genomic regions, were constructed and used to select
electroporation conditions.
When nonpiliated B385 cells, suspended in electroporation buffer
(glycerol 15%; MgCl2 1
mM; Sucrose 272 mM; HEPES 1 mM; pH 7.2), were mixed with 200 ng of
plasmid DNA and
a single pulse of 11.5 kV/cm, 400W and
25 mF was
applied (in a BioRad Gene Pulser II), transformation efficiencies
up to 6.5 x 104
transformants/mg and survival rates of
up to 80% were
reached. The generation with this method, of an lpdA
neisserial knock-out mutant, is
also shown. To date this is the first electroporation report in
meningococci.
Keywords: electroporation, N. meningitidis,
transformation efficiency
RESUMEN
En este artículo describimos un
protocolo de
electroporación para Neisseria meningitidis. Varios
plasmidios de hasta 12,5
kb, conteniendo regiones genómicas interrumpidas por un
marcador de
selección, fueron construidos y usados para establecer las
condiciones de
electroporación. Cuando se mezclaron células de B385
no piliadas,
suspendidas en el tampón de electroporación (15%
glicerol; 1 mM MgCl2;
272 mM sacarosa; 1 mM HEPES; pH 7,2), con 200 ng de ADN
plasmídico, se
obtuvieron eficiencias de transformación que alcanzaron 6,5
x 104
transformantes/mg con porcientos de
supervivencia
alrededor de 80. También se muestra la generación, a
través de este
método, de un mutante de N. menigitidis para el gen
lpdA. Este
constituye el primer reporte describiendo la técnica de
electroporación
aplicada a meningococo.
Palabras claves: electroporación, N.
meningitidis, eficiencia de
transformación
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