Biotecnología Aplicada 1998;15:254-257
Influence of the length of the P64k protein N-terminus
stabilizing peptide
on the expression in Escherichia
coli
of the fused TbpB from Neisseria meningitidis
Tamara Menéndez, Luis M Alonso, Mairet Pérez,
Rolando
Pajón, Ricardo Silva
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ABSTRACT
In order to improve the previously patented
system for the
expression of heterologous antigens in Escherichia coli, the
possibility of reducing the
length of the 45 amino acid (aa) stabilizer peptide from the P64k
protein of Neisseria
meningitidis, was investigated. The TbpB protein from N.
meningitidis was
expressed fused to the first 23 and 11 aa from the P64k protein and
without the stabilizer
peptide. The levels of expression of the TbpB protein were very
low, only detectable by
Western blotting when expressed without the stabilizer peptide or
fused to the first 11 aa from
the P64k protein. High levels of expression were achieved when the
protein was expressed
fused to the first 23 aa from the P64k protein. These results
showed that it is possible to
reduce the length of the stabilizer peptide derived from the P64k
protein to one half without
affecting the levels of expression of the fusion protein.
Keywords: P64k protein, transferrin binding proteins,
TbpB, expression system,
fusion proteins
RESUMEN
Con el objetivo de optimizar el sistema de
expresión de
antígenos heterólogos en Escherichia coli,
patentado previamente, se
investigó la posibilidad de reducir la talla del fragmento
estabilizador de 45
aminoácidos (aa) provenientes de la proteína P64k de
Neisseria
meningitidis. La proteína TbpB de N. meningitidis
se expresó en
E.coli fusionada a los primeros 23 y 11 aa de la
proteína P64k y sin el
fragmento estabilizador. En los dos últimos casos se
obtuvieron niveles bajos de
expresión de TbpB, solo detectables mediante Western
blotting. Se obtuvieron
altos niveles de expresión de TbpB, cuando se expresó
fusionada a los
primeros 23 aa de la proteína P64k. Estos resultados
muestran que es posible reducir
hasta la mitad la talla del fragmento estabilizador derivado de la
proteína P64k sin
afectar los niveles de expresión de la proteína de
fusión.
Palabras claves: proteína P64k,
proteínas de
unión a transferrina, TbpB, sistemas de expresión,
proteínas de
fusión
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