Biotecnologia Aplicada 1999; Vol. 16 No. 1, pp. 25 -
28
Preparación De
Oligosacáridos De Neisseria meningitidis
Serogrupo C Por Hidrólisis Ácida
Juan C Martínez, Vivian Rodríguez,
Yaima Merchán, Rolando Ochoa,
Eric A Estrada, Mayte Nerey, Rosa Blanco, Tania Licea
Code Number: BA99006
ABSTRACT
The current antimeningococcal vaccine, composed of the
purified capsular polysaccharide of group C (PS-C) does not induce
a good antibody response in children under two years of age. This
drawback has usually been overcome by coupling immunogenic proteins
to PS or oligosaccharides to convert these antigens to a
T-dependent form. In this study the purified PS-C was depolymerized
by acid hydrolysis to obtain oligosaccharides C (OS-C), and it was
evaluated the integrity of their antigenic properties by inhibition
ELISA. Twenty OS-C were obtained by this experimental procedure.
The molecular size of the meningococcal OS-C was determined by gel
filtration. Significant differences between the molecular size of
the OS-C were obtained with different pH and temperature values. An
inhibition ELISA was developed in order to evaluate the antigenic
properties of the OS-C obtained. The antigenic properties were
dependent on the molecular size. Oligosaccharides with the same
antigenic properties as Neisseria meningitidis PS-C were
obtained by acid hydrolysis at 60 C, pH 4 for 20 min.
Keywords: acid hydrolysis, capsular polysaccharide,
conjugate vaccines, ELISA, meningococcus C
RESUMEN
La vacuna existente de polisacárido capsular
purificado de Neisseria meningitidis serogrupo C (PS-C)
posee serias limitaciones por la pobre inmunogenicidad y la corta
duración de la respuesta en niños menores de dos
años de edad. Numerosos estudios han demostrado la utilidad
de la conjugación covalente de proteínas portadoras
con polisacáridos (PS) o fragmentos antigénicos de
éstos (oligosacáridos) para superar estas limitantes.
El objetivo propuesto en este estudio fue obtener
oligosacáridos C (OS-C) a partir de PS-C por
hidrólisis ácida, y evaluar la conservación de
sus propiedades antigénicas mediante un ELISA de
inhibición. Se obtuvieron 20 OS-C como resultado del
diseño de dos experimentos de hidrólisis
ácida. Se determinó su talla molecular relativa por
filtración en gel, y se encontraron diferencias
significativas con las variaciones de pH y temperatura de
hidrólisis utilizadas. Se desarrolló un ELISA de
inhibición para la evaluación de la
conservación de las propiedades antigénicas de los
OS, y se halló que éstas fueron directamente
proporcionales al tamaño molecular. Se obtuvieron OS-C
antigénicamente similares al PS-C con 20 min de
hidrólisis ácida a 60C y pH 4.
Palabras claves: ELISA, hidrólisis ácida,
meningococo C, polisacárido capsular, vacunas conjugadas
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