Biotecnología Aplicada 1999;16:83-87
Caracterización estructural y funcional de la
proteína recombinante P64k de Neisseria meningitidis
Raú, Gómez, Joel Madrazo, Javier
González, Glay Chinea, Alexis Mussachio, Armando
Rodríguez, Gabriel Padrón
Code Number: BA99014
Abstract
The recombinant protein P64k from the bacterium Neisseria
meningitidis has been identified as a dihydrolipoamide
dehydrogenase. The enzyme catalyses the stoichiometric oxidation of
dihydrolipoamide by nicotinamide adenine dinucleotide, involving a
flavin adenine dinucleotide as cofactor. Chemical modification with
iodoacetamide indicated the involvement in catalysis of a
reversibly reducible disulphide bond. Migration of cross-linked
protein in polyacrylamide gel electrophoresis showed that the
protein is a functional homodimer. Gel filtration chromatography
showed the P64k protein to migrate beyond the expected molecular
weight. This abnormal behaviour is discussed taking into account
the structure-function relationship.
Keywords: cross-linking, dihydrolipoamide-dehydrogenase,
flavoprotein, Neisseria meningitidis
Resumen
La proteína recombinante P64k de la bacteria Neisseria
meningitidis, ha sido identificada como una
dihidrolipoamida-deshidrogenasa. La enzima cataliza la
oxidación estequiométrica de la dihidrolipoamida por
el dinucleótido de adenina y nicotinamida, con el
dinucleótido de adenina y flavina como cofactor. La
modificación química con yodoacetamida indicó
la participación, en la catálisis, de un puente
disulfuro reversiblemente reducible. La migración de la
proteína (posterior a los ensayos de entrecruzamiento
molecular) en electroforesis sobre geles de poliacrilamida,
demostró que la misma es un homodímero funcional. La
cromatografía de filtración en gel evidenció
que la P64k migra más allá del peso molecular
esperado. Esta conducta anómala se discute teniendo en
cuenta la relación estructura-función.
Palabras claves: dihidrolipoamida-deshidrogenasa,
entrecruzamiento molecular, flavoproteína, Neisseria
meningitidis
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