Biotecnología Aplicada 1999;16:97-102
Expresión del gen dex en la levadura
Kluyveromyces lactis
Carmen E Gómez, Javier J Menéndez, and Bianca M
García
Code Number:BA99017
Abstract
In this study, the expression and secretion of
dextranase enzyme from the fungus Penicillium
minioluteum in the non-conventional yeast Kluyveromyces
lactis, was evaluated. The cDNA encoding this
protein with its own signal peptide was integrated into the genome
of K. lactis strain MW105-2A under the control of the LAC4 promoter.
Dextranase was detected by the hydrolysis of blue dextran added to
solid growth medium and the enzymatic activity was determined
colorimetrically by the DNSA method. Dextranase was efficiently
expressed and secreted in this yeast. The obtention of this
construction constitutes the first step in the use of
dextranase-encoding gene as reporter in gene expression studies in
the yeast K. lactis.
Keywords: dextranase, gene expression, Kluyveromyces
lactis, Penicillium minioluteum
Resumen
En el presente trabajo, se evaluó la
expresión y secreción de la enzima dextranasa del
hongo
Penicillium minioluteum en la levadura no convencional
Kluyveromyces lactis. El ADN complementario que codifica la
proteína con su propia secuencia señal, se
integró en el genoma de la cepa MW105-2A de
K. lactis
bajo el control del promotor del gen
LAC4. La presencia de
la enzima dextranasa se detectó por la formación de
halos de hidrólisis en placas que contienen dextrana azul, y
la actividad enzimática se determinó de forma
colorimétrica mediante el método del DNSA. Esta
enzima se expresó y secretó eficientemente en esta
levadura, lo que constituye el primer paso para el empleo del gen
codificante de esta enzima como reportero en estudios de
expresión génica en
K. lactis.
Palabras claves: dextranasa, expresión
génica
, Kluyveromyces lactis,
Penicillium
minioluteum
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