Biotecnologia Aplicada 1999; Vol. 16 No. 3, pp.160-164
Comparación de la quimiosina bovina
secretada al medio de cultivo por cepas recombinantes de las
levaduras Pichia pastoris y Kluyveromyces lactis
Ángela E Sosa Espinosa, Jorge Sotolongo
Peña, Vladimir Martínez Santana,
Rossana García Fernández, Juan Morales Grillo
Code Number: BA99027
ABSTRACT
Bovine chymosin, an aspartic protease that is used for
the industrial production of cheese, is extracted from the stomachs
of calves. To be obtained from another source, chymosin has been
cloned in different microorganisms. However, the post-translational
modifications of the recombinant enzyme that frequently occur in
the host cells may change its biochemical properties. In this work,
the properties of a raw material which contains the bovine chymosin
produced in recombinant strains of the yeasts Pichia
pastoris or Kluyveromyces lactis are studied.
Recombinant chymosin glycosilation was analyzed by the periodic
acid-Schiff reaction on polyacrylamide slab gels. Besides, the
effect of several parameters (the molar concentration of
Ca2+ ions, pH, temperature) on the chymosin coagulant
activity and the proteolytic activity and the thermal stability of
the enzyme in solution, were studied. In comparison with the yeast
K. lactis, it was observed that P. pastoris can be a
better host for the expression of chymosin, since the properties of
the P. pastoris-derived enzyme seemed to be closer to those
of the natural enzyme.
Keywords: Kluyveromyces lactis, Pichia
pastoris, recombinant chymosin
RESUMEN
La quimiosina bovina, una proteasa aspártico-dependiente
que se utiliza para la producción industrial de quesos, se
extrae de los estómagos de terneros lactantes. Para
obtenerla de otra fuente, la quimiosina ha sido clonada en varios
microorganismos. Sin embargo, las modificaciones postraduccionales
de la enzima recombinante que ocurren con frecuencia en la
célula hospedera, pueden cambiar sus propiedades
bioquímicas. En este trabajo se estudian las propiedades de
un crudo que contiene la quimiosina bovina producida en cepas
recombinantes de las levaduras Pichia pastoris y
Kluyveromyces lactis. La glicosilación de la
quimiosina recombinante se analizó mediante la
reacción de ácido peryódico-Schiff en geles
laminares de poliacrilamida. Además, se estudió el
efecto de varios parámetros (concentración molar de
iones Ca2+, pH y temperatura) sobre la actividad
coagulante de la quimiosina, la actividad proteolítica y la
termoestabilidad de la enzima en solución. En
comparación con la levadura K. lactis, se
observó que P. pastoris puede ser un hospedero
más adecuado para la expresión de la quimiosina, ya
que las propiedades de la enzima derivada de esta
última fueron más cercanas a las de la enzima
natural.
Palabras claves: Kluyveromyces lactis, Pichia
pastoris, quimiosina recombinante
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