search
for
 About Bioline  All Journals  Testimonials  Membership  News  Donations


Biotecnologia Aplicada
Elfos Scientiae
ISSN: 0684-4551
Vol. 16, No. 3, 1999
Bioline Code: ba99027
Full paper language: English
Document type: Research Article
Document available free of charge

Biotecnologia Aplicada, Vol. 16, No. 3, 1999

 en Comparación de la quimiosina bovina secretada al medio de cultivo por cepas recombinantes de las levaduras Pichia pastoris y Kluyveromyces lactis

Abstract

Biotecnologia Aplicada 1999; Vol. 16 No. 3, pp.160-164

Comparación de la quimiosina bovina secretada al medio de cultivo por cepas recombinantes de las levaduras Pichia pastoris y Kluyveromyces lactis

Ángela E Sosa Espinosa, Jorge Sotolongo Peña, Vladimir Martínez Santana,
Rossana García Fernández, Juan Morales Grillo

Code Number: BA99027

ABSTRACT

Bovine chymosin, an aspartic protease that is used for the industrial production of cheese, is extracted from the stomachs of calves. To be obtained from another source, chymosin has been cloned in different microorganisms. However, the post-translational modifications of the recombinant enzyme that frequently occur in the host cells may change its biochemical properties. In this work, the properties of a raw material which contains the bovine chymosin produced in recombinant strains of the yeasts Pichia pastoris or Kluyveromyces lactis are studied. Recombinant chymosin glycosilation was analyzed by the periodic acid-Schiff reaction on polyacrylamide slab gels. Besides, the effect of several parameters (the molar concentration of Ca2+ ions, pH, temperature) on the chymosin coagulant activity and the proteolytic activity and the thermal stability of the enzyme in solution, were studied. In comparison with the yeast K. lactis, it was observed that P. pastoris can be a better host for the expression of chymosin, since the properties of the P. pastoris-derived enzyme seemed to be closer to those of the natural enzyme.

Keywords: Kluyveromyces lactis, Pichia pastoris, recombinant chymosin

RESUMEN

La quimiosina bovina, una proteasa aspártico-dependiente que se utiliza para la producción industrial de quesos, se extrae de los estómagos de terneros lactantes. Para obtenerla de otra fuente, la quimiosina ha sido clonada en varios microorganismos. Sin embargo, las modificaciones postraduccionales de la enzima recombinante que ocurren con frecuencia en la célula hospedera, pueden cambiar sus propiedades bioquímicas. En este trabajo se estudian las propiedades de un crudo que contiene la quimiosina bovina producida en cepas recombinantes de las levaduras Pichia pastoris y Kluyveromyces lactis. La glicosilación de la quimiosina recombinante se analizó mediante la reacción de ácido peryódico-Schiff en geles laminares de poliacrilamida. Además, se estudió el efecto de varios parámetros (concentración molar de iones Ca2+, pH y temperatura) sobre la actividad coagulante de la quimiosina, la actividad proteolítica y la termoestabilidad de la enzima en solución. En comparación con la levadura K. lactis, se observó que P. pastoris puede ser un hospedero más adecuado para la expresión de la quimiosina, ya que las propiedades de la enzima derivada de esta última fueron más cercanas a las de la enzima natural.

Palabras claves: Kluyveromyces lactis, Pichia pastoris, quimiosina recombinante

Copyright 1999 Elfos Scientiae

 

Alternative site location: http://elfosscientiae.cigb.edu.cu/Archivo.asp?Id=6

Home Faq Resources Email Bioline
© Bioline International, 1989 - 2020, Site last up-dated on 09-Nov-2020.
Site created and maintained by the Reference Center on Environmental Information, CRIA, Brazil
System hosted by the Internet Data Center of Rede Nacional de Ensino e Pesquisa, RNP, Brazil