Biotecnologia Aplicada 1999; Vol. 16 No. 3, pp. 169-172
Production of an Anti-carcinoembryonic Antigen
Single-chain Fv Antibody Fragment as a Cytoplasmic Protein in
Escherichia coli
Javier E Vázquez, Freya Freyre, Marta
Ayala, Leonardo Canaán-Haden,
Hanssel Bell, Jorge V Gavilondo
Code Number: BA99029
ABSTRACT
In this paper, a strategy to increase expression in
Escherichia coli and simplify the purification of a
single-chain Fv (scFv) antibody fragment specific for the
carcinoembryonic antigen (CEA), is reported. The anti-CEA scFv
fragment was expressed as an insoluble fusion protein in the
cytoplasm of E. coli, with an N-terminal domain related in
part with the first amino acids of human interleukin 2, and a
C-terminal hexahistidine tag. The scFv fragment was extracted by
solubilization, purified by immobilized metal ion affinity
chromatography and refolded in a slightly alkaline buffer. With
this system, the yield of active scFv increased four-fold when
compared to a periplasmic variant of the same scFv, previously
produced by the authors.
Keywords: antibody fragments, carcinoembryonic antigen,
CEA, E. coli, scFv
RESUMEN
En este trabajo se describe una estrategia para incrementar
los niveles de expresión en Escherichia coli y
simplificar el proceso de purificación, de un fragmento de
simple cadena (scFv) de un anticuerpo específico contra el
antígeno carcinoembrionario. El fragmento scFv expresado en
el citoplasma de E. coli en forma de
proteína fusionada e insoluble, posee en su extremo amino un
dominio relacionado parcialmente con los primeros
aminoácidos de la interleuquina 2 humana, mientras que en su
extremo carboxilo incluye un dominio de seis histidinas
consecutivas. El fragmento scFv fue extraído por
solubilización, purificado mediante cromatografía de
enlazamiento metálico y renaturalizado en una
solución tampón de pH ligeramente alcalino. Con este
sistema se incrementó en cuatro veces el rendimiento final
de scFv activo, en comparación con una variante
periplásmica previamente obtenida por los autores.
Palabras claves: antígeno carcinoembrionario, CEA,
E. coli, fragmentos de anticuerpos, scFv
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