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Biotecnologia Aplicada
Elfos Scientiae
ISSN: 0684-4551
Vol. 16, No. 3, 1999
Bioline Code: ba99029
Full paper language: English
Document type: Research Article
Document available free of charge

Biotecnologia Aplicada, Vol. 16, No. 3, 1999

 en Production of an Anti-carcinoembryonic Antigen Single-chain Fv Antibody Fragment as a Cytoplasmic Protein in Escherichia coli

Abstract

Biotecnologia Aplicada 1999; Vol. 16 No. 3, pp. 169-172

Production of an Anti-carcinoembryonic Antigen Single-chain Fv Antibody Fragment as a Cytoplasmic Protein in Escherichia coli

Javier E Vázquez, Freya Freyre, Marta Ayala, Leonardo Canaán-Haden,
Hanssel Bell, Jorge V Gavilondo

Code Number: BA99029

ABSTRACT

In this paper, a strategy to increase expression in Escherichia coli and simplify the purification of a single-chain Fv (scFv) antibody fragment specific for the carcinoembryonic antigen (CEA), is reported. The anti-CEA scFv fragment was expressed as an insoluble fusion protein in the cytoplasm of E. coli, with an N-terminal domain related in part with the first amino acids of human interleukin 2, and a C-terminal hexahistidine tag. The scFv fragment was extracted by solubilization, purified by immobilized metal ion affinity chromatography and refolded in a slightly alkaline buffer. With this system, the yield of active scFv increased four-fold when compared to a periplasmic variant of the same scFv, previously produced by the authors.

Keywords: antibody fragments, carcinoembryonic antigen, CEA, E. coli, scFv

RESUMEN

En este trabajo se describe una estrategia para incrementar los niveles de expresión en Escherichia coli y simplificar el proceso de purificación, de un fragmento de simple cadena (scFv) de un anticuerpo específico contra el antígeno carcinoembrionario. El fragmento scFv expresado en el citoplasma de E. coli en forma de proteína fusionada e insoluble, posee en su extremo amino un dominio relacionado parcialmente con los primeros aminoácidos de la interleuquina 2 humana, mientras que en su extremo carboxilo incluye un dominio de seis histidinas consecutivas. El fragmento scFv fue extraído por solubilización, purificado mediante cromatografía de enlazamiento metálico y renaturalizado en una solución tampón de pH ligeramente alcalino. Con este sistema se incrementó en cuatro veces el rendimiento final de scFv activo, en comparación con una variante periplásmica previamente obtenida por los autores.

Palabras claves: antígeno carcinoembrionario, CEA, E. coli, fragmentos de anticuerpos, scFv

Copyright 1999 Elfos Scientiae

 

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