Biotecnología Aplicada 1999;16:226-231
Variable Level Expression of Hepatitis C Virus Core Protein
in a Prokaryotic System. Analysis of the Humoral Response against It in Rabbits
Santiago Dueñas-Carrera, Juan Morales, Nelson Acosta-Rivero,
Lázaro J Lorenzo, Ciro García, Thelvia Ramos, Ivis Guerra, Maxlenin
Peña
Code Number:BA99036
ABSTRACT
Experimental evidence suggests that the hepatitis C virus (HCV) core protein has
several biological properties and is implicated as a viral factor in HCV-mediated
pathogenesis. In this study, CoE1.339, Co.176 and Co.120 variants of the HCV capsid
protein were produced at variable levels in Escherichia coli from pNCoE1, pN12 and
pSLCo120 plasmids, respectively. The chimera CoE1.339 spans the first 339 amino acids of
the viral polyprotein, fused to the 45 amino acids stabilizer peptide from P64K protein of
Neisseria meningitidis. Co.176 is a non-fused variant encompassing amino acids
1176 of the capsid protein sequence. Both CoE1.339 and Co.176 were expressed under the
transcriptional control of the tryptophan promoter and the protein was only detected by
Western blot. However, Co.120, a variant truncated at the C-terminus which contains amino
acids 1120 of the HCV core protein fused to a leader tag of six histidines, was successfully
produced under the control of the T7 promoter in BL21 (DE3) cells. Like Co.176 and
CoE1.339, Co.120 was efficiently recognized by human anti-HCV positive serum. Purified
Co.120 antigen showed to be immunogenic in rabbits. Synthetic peptides covering amino
acids 140 of the core protein showed the greatest reactivity to the rabbit anti-Co.120
serum.
Keywords: E. coli, expression, HCV, hepatitis C virus, immunogenicity,
nucleocapsid core protein, purification
RESUMEN
Nivel de expresión variable de la proteína de la cápsida del
virus de la hepatitis C en un sistema procariótico. Análisis de la respuesta
inmune humoral en conejos. La proteína de la cápsida del virus de
la hepatitis C (VHC) posee numerosas propiedades biológicas y está
implicada en los mecanismos de patogénesis viral. En este trabajo, las variantes
CoE1.339, Co.176 y Co.120 de la proteína de la cápsida fueron producidas a
niveles variables en Escherichia coli a partir de los plásmidos pNCoE1, pN12 y
pSLCo120, respectivamente. La proteína quimérica CoE1.339 abarca los
primeros 339 aminoácidos de la poliproteína viral, fusionados al
péptido estabilizador de 45 aminoácidos de la proteína P64K de
Neisseria meningitidis. Co.176 es una variante no fusionada correspondiente a los
aminoácidos 1176 de la proteína de la cápsida. Las variantes
CoE1.339 y Co.176 fueron producidos a partir de sus respectivos genes bajo el control
transcripcional del promotor triptófano, a niveles sólo detectables por
Western blot. Sin embargo, la variante Co.120, compuesta por los primeros 120
aminoácidos de la proteína de la cápsida fusionados a un
péptido líder de seis histidinas, fue producida con éxito en la cepa
BL21(DE3). Al igual que Co.176 y CoE1.339, Co.120 fue reconocida por un suero positivo
humano anti-VHC. La proteína Co.120 purificada resultó ser
inmunogénica en conejo. Péptidos sintéticos que abarcan los
primeros 40 aminoácidos de la proteína de la cápsida, mostraron la
mayor reactividad contra el suero de conejo anti-Co.120.
Palabras claves: E. coli, expresión, inmunogenicidad, nucleocápsida,
purificación, VHC, virus de la hepatitis C
Copyright Elfos Scientiae 1999
