Biotecnología Aplicada 1999;16:237-241
Molecular Techniques for the Detection of Tomato Yellow
Leaf Curl Geminivirus in Infected Plants and Viruliferous Whiteflies
Lisset Herrera, Orlene Guerra, Pedro L Ramos, Rudy Peral, Ana L
Echemendía, Nadia Ramírez, Vivian Doreste, Pedro Oramas
Code Number:BA99038
Abstract
The tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) causes major yield losses in tomato
production in many tropical and subtropical regions. Therefore, there is an increased need to
apply molecular methods for the detection and characterization of the main TYLCV isolates
that affect Cuban tomato plantations. A DNA fragment containing the gene encoding the coat
protein of a Cuban TYLCV isolate was amplified by polymerase chain reaction (PCR). DNA
hybridization with specific radiolabeled probes corroborated the identity of the amplified
product, and allowed to analyze the integration into a full-length TYLCV genome. The
threshold of TYLCV detection by PCR in plants and viruliferous whiteflies was within the
reported range. To detect TYLCV infections, samples collected from tomato plantations of
several regions in Cuba were analyzed by PCR. The amplified coat protein gene was also
effectively used as a DNA probe in Dot blot assays to detect geminivirus in plants.
Keywords: Dot blot, geminiviruses, PCR, TYLCV, virus diagnosis
Resumen
Técnicas moleculares para la detección del virus del
encrespamiento amarillo de la hoja del tomate en plantas infectadas y moscas
virulíferas. El virus del encrespamiento amarillo de la hoja del tomate (TYLCV)
causa grandes pérdidas en las plantaciones de este cultivo. Los métodos
moleculares se hacen cada vez más necesarios para su diagnóstico y
caracterización. Mediante el uso de la reacción en cadena de la polimerasa
(RCP), se aisló el gen que codifica la proteína de la cápsida del
TYLCV. El uso de sondas radiactivas específicas, corroboró la identidad del
producto amplificado y permitió analizar la integración en el genoma del
TYLCV. El límite de detección del virus mediante la RCP a partir de ADN
total de plantas y moscas virulíferas estuvo en el rango reportado. Mediante la RCP
se analizaron muestras de tomate de plantaciones de varias localidades de Cuba. El gen de la
proteína de la cápsida amplificado también fue utilizado
efectivamente como sonda en ensayos de Dot blot para detectar geminivirus en los
cultivos.
Palabras claves: diagnóstico de virus, Dot blot, geminivirus, RCP,
TYLCV
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