Biotecnología Aplicada 1999;16:246-248
Human Anti-ganglioside IgG Antibody Response Induced by
in vitro Immunization with Liposomes Containing GM3(NeuGc) Ganglioside
Mauro Alfonso, Peter Ifversen, Jesper Zeuthen
Code Number:BA99040
ABSTRACT
A new in vitro immunization system of human peripheral blood lymphocytes using
liposomes containing gangliosides, is described. Purified human B lymphocytes were
cultured in the CD40 system in the presence of liposomes containing different concentrations
of GM3(NeuGc) ganglioside, ranging from 1 to 1000 ng/mL. After an initial primary in vitro
immunization period (34 days), antigen-stimulated B cells and autologous activated CD4+
T lymphocytes previously activated with an anti-CD3 monoclonal antibody were cultured in
the presence of staphylococcal enterotoxin A. Human antibody production was measured by
an anti-ganglioside ELISA after 4 and 8 days of culture. Specific antibody responses against
GM3(NeuGc) of IgM and IgG isotypes were induced after 4 days in culture, and a
predominant antigen-specific IgG antibody production was observed 8 days after antigenic
stimulation.
Keywords: ganglioside, human antibody, in vitro immunization
RESUMEN
Respuesta de anticuerpos humanos anti-gangliósidos inducida por
inmunización in vitro con liposomas que contienen al gangliósido
NeuGcGM3. Se describe un nuevo sistema de inmunización in vitro de
linfocitos humanos de sangre periférica mediante el uso de liposomas que contienen
gangliósidos. Linfocitos B humanos purificados fueron cultivados en el sistema
CD40 en presencia de liposomas que contenían al gangliósido NeuGcGM3 a
diferentes concentraciones (11 000 ng/mL), y después de un período inicial
de inmunización in vitro primaria (34 días), células B estimuladas
por el antígeno y linfocitos T CD4+ autólogos activados previamente con un
anticuerpo monoclonal anti-CD3, fueron cultivados en presencia de la enterotoxina A
estafilocóccica. La producción de anticuerpos humanos en los sobrenadantes
de cultivo fue analizada mediante un ELISA anti-gangliósidos después de 4 y
8 días de cultivo. Se obtuvieron respuestas de anticuerpos específicos de tipo
IgM e IgG contra NeuGcGM3 después de 4 días de cultivo, mientras que 8
días después de la estimulación antigénica, se
encontró una producción de anticuerpos humanos específicos para el
antígeno predominantemente de tipo IgG.
Palabras claves: anticuerpo humano, gangliósido, inmunización in vitro
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