en

RECOVERY OF amiRNA3-PARP1 TRANSGENIC MAIZE PLANTS USING A BINARY VECTOR HAVING THE BIOSAFE PMI GENE Matheka, J.M.; Rasha, A.O.; Anami, S.; Gethi, J.; Masiga, C.; Mugoya, C.; Machuka, J. & Runo, S. Abstract Positive plant selectable marker genes are commonly used in plant transformation because they not only enhance the frequency of generation transgenic tissues but are considered biosafe, unlike antibiotic or herbicide resistance genes. In this study, the binary vector pNOV2819-ubiamiRNA3PARP1, harbouring the phosphomannose isomerase (pmi) gene was developed and used in recovery of transgenic maize ( Zea mays L.) plants containing the drought tolerance gene, amiRNA3-PARP1. The pre-amiRNA3-PARP1 and Tnos transgenes were sequentially PCR-cloned upstream the ubiquitine promoter in the Ubi/NC1300 plasmid. The pre-amiRNA3-PARP1 expression cassette was transferred into the pmi gene-containing pNOV2819 plasmid to produce the pNOV2819-ubiamiRNA3PARP1 vector. Transgenic IL3 and A188 plants containing pre-amiRNA3-PARP1 were generated through transformation with LBA4404 harbouring the pNOV2819-ubiamiRNA3PARP1 vector. The plants were confirmed transgenic by PCR. It is clear that the developed vectors are effective in recovery of amiRNA3-PARP1 transgenic tissues and plants containing the pmi gene, which has been shown to have no negative environmental or health effects. Keywords Agrobacterium transformation; amiRNA; PMI; Zea mays

fr

Matheka, J.M.; Rasha, A.O.; Anami, S.; Gethi, J.; Masiga, C.; Mugoya, C.; Machuka, J. & Runo, S. Résumé Les marqueurs génétiques de sélection positive de plantes sont communément utilisés dans la transformation des plantes parce que, non seulement ils augmentent la fréquence de la génération des tissus transgéniques, mais aussi sont considérés comme biosains, à l’inverse des gènes de résistance aux antibiotiques et herbicides. Dans cette étude, le vecteur binaire pNOV2819-ubiamiRNA3PARP1 portant le gène isomérase phosphomannose (pmi) a été développé et utilisé dans le recouvrement transgénique des plantes du maïs ( Zea mays L.) contenant le gène to tolérance à la sécheresse amiRNA3-PARP1. Les transgènes pre-amiRNA3-PARP1 et Tnos étaient séquentiellement clonés par PCR dans la partie supérieure du promoteur ubiquitine dans le plasmide Ubi/NC1300. L’expression de la cassette de la pré-amiRNA3-PARP1 était transférée dans le gène pmi contenant le plasmide pNOV2819 pour produire le vecteur pNOV2819-ubiamiRNA3PARP1. Les plants transgéniques IL3 et A188 contenant le pre-amiRNA3-PARP1 étaient générés à travers la transformation avec LBA4404 portant le vecteur pNOV2819-ubiamiRNA3PARP1. Les plants étaient confirmées transgéniques par PCR. Il est clair que les vecteurs développés sont efficaces dans le recouvrement des tissus transgéniques amiRNA3-PARP1 et les plants contenant le gène pmi qui ne présentent aucun effet négatif sur l’environnement et la santé. Mots Clés Transformation Agrobacterium; amiRNA; PMI; Zea mays

© Copyright 2014 - African Crop Science Journal