Biotecnologia Aplicada Elfos Scientiae ISSN: 0684-4551 Vol. 17, Num. 2, 2000, pp. 126

Biotecnología Aplicada 2000;17:126

Efecto de la inmunoterapia sobre larvas infectantes (LI)
de Trichinella spiralis implantadas en músculo estriado
en modelo experimental

Gabriela Reveles,¹ Jesús Muñoz,² Sergio J Saldívar,¹ María A Moreno¹

¹Centro de Biología Experimental. ²Instituto de Investigaciones Odontológicas. Universidad Autónoma de Zacatecas. Apartado Postal 12. Guadalupe, Zac. México. 98600

Code Number: ba00039

Introducción

La enfermedad causada por Trichinella spiralis es la trichinellosis. En el hombre, se ha reportado en casi todo el mundo, su prevalencia es alta en Europa y Asia, y se asocia con la ingesta de carne infectada mal cocida o cruda, principalmente de cerdo. En México, la investigación epidemiológica relacionada con trichinellosis indica que esta enfermedad tiene una frecuencia hasta de 8,1% de la población general, por lo que se considera un problema de salud pública. Zacatecas, Jalisco, Estado de México y Chihuahua, son los estados con mayor frecuencia de brotes de trichinellosis reportados oficialmente de 1938 a 1995 [1].

Ciclo vital de T. spiralis

Cuando un huésped consume larvas infectantes (LI) de un músculo estriado, éstas son liberadas por acción de las enzimas digestivas y son transportadas al intestino delgado donde sufren 4 mudas, madurando a adultos. Éstos están capacitados para la fecundación, dando origen a larvas recién nacidas (LRN), migrando a la lámina propia y después a vasos linfáticos y mesentéricos o directamente al torrente sanguíneo vía porta, de ahí a músculo estriado, donde se lleva a cabo el implante y el proceso de LRN a LI. En alrededor de un mes se forma una cápsula y el quiste se forma después de 6 a 9 semanas [2]. Después de 6 meses, comienza a calcificarse, concluyendo ésta, aproximadamente a los 18 meses. A pesar de la calcificación, las LI siguen viables por años. La infección por T. spiralis induce en el huésped una fuerte respuesta inmune local a nivel intestinal y posteriormente se da la respuesta sistémica. Sin embargo, su actividad es insuficiente para evitar el implante de LI, por la cual, si se utilizan antígenos que sean potentes inmunógenos capaces de estimular el sistema inmunitario de manera activa, dirigirán el ataque inmunológico [3] contra el implante de las LI. Teniendo como base este conocimiento, se propone la alternativa de la inmunoterapia para despertar una respuesta inmune amplificada contra las LI de T. spiralis implantadas en músculo estriado.

Objetivo

Aplicación de inmunoterapia con antígeno soluble total para modificar el implante de las LI de T. spiralis en músculo estriado.

Material y Métodos

Se utilizaron 10 ratas Long Evans machos de 2 meses y medio de edad que se infectaron vía oral con aproximadamente 500 LI y se dejaron un año en observación con la finalidad de que, en músculo estriado, las LI estuvieran calcificadas. Previa a la infección, las ratas se sangraron para evaluar la respuesta inmune por técnicas inmunológicas, microinmunodifusión (MID) e inmunoelectrotransferencia (IET), se tomó biopsia para observar directamente al microscopio y otra fracción se fijó en formol al 10% para ser procesada y teñida con hematoxilina-eosina. Se hicieron 2 grupos de 5 animales, el primero fue de control y el segundo recibió inmunoterapia aplicada por 5 días consecutivos en dosis ascendente de 100 a 500 mm. Al día 10, se dio un refuerzo con 500 mm. A los 15 días posteriores, ambos grupos se sangraron para realizar técnicas inmunológicas, se tomó biopsia para observar directamente al microscopio y una fracción se fijó en formol al 10% para ser procesada y teñida con hematoxilina-eosina Al día 30 posterior a la inmunoterapia, los animales se sacrificaron, tomando muestras de sangre para técnicas inmunológicas y biopsia de diafragma, masetero, lengua y pierna, las cuales se observaron por compresión directamente al microscopio de luz y se fijaron para tinción de hematoxilina-eosina. Así mismo, se llevó a cabo digestión del tejido muscular para cuantificar el número de las LI y obtención del antígeno soluble total, al cual se le realizó electroforesis en geles de poliacrilamida.

Resultados

Los animales que recibieron inmunoterapia subieron de peso 10 g como promedio, su pelo se hizo brillante y menos erizo, la MID inicial fue de 2 a 3 bandas y la final de 1 banda. En la IET inicial se detectaron 5 péptidos de 33, 43, 45, 48 y 67 kD. Posterior a la inmunoterapia, se detectaron únicamente 3 péptidos de 43, 45 y 48 kD. En la compresión inicial, al observarla al microscopio de luz, se encontraron LI de T. spiralis calcificadas. Posterior a la inmunoterapia, hubo un aumento de vascularización, aumento de acúmulos de grasa, aumento de pofimorfonucleares y disminución del número de LI calcificadas.

Discusión

Una vez que ha llegado, la LRN evoluciona a LI en músculo y se enquista, evadiendo la respuesta inmune del huésped y no existe ningún tratamiento alternativo para remover las LI. En este estudio, se estableció la alternativa de la inmunoterapia con el antígeno soluble total, el cual tuvo un efecto sobre la respuesta inmune en contra de las LI de T. spiralis y mejoró el estado físico del animal, estableciendo un campo de estudio en el tratamiento de las parasitosis.

References

1. Correa D, De la Rosa JL, Ortega-Pierres MG. Trichinellosis: human epidemiological data in Mexico from 1939 to 1995. ICT9. Trichinellosis 1996;519–23.

2. Reveles RG, Villalobos R, Saldívar S, Moreno A. Histologic experimental implant of T. spiralis. ICT9. Trichinellosis 1996;79–85.

3. Moreno GA, Muñoz EJ, Rumayor RA. The 45 kDa antigen of Trichinella spiratis induce protection in experimental infections. ICT9. Trichinellosis 1996;261–7.

Papers from Biotecnología Habana`99 Congress.
November 28-December 3, 1999.