Biotecnologia Aplicada Elfos Scientiae ISSN: 0684-4551 Vol. 18, Num. 2, 2001, pp. 109-111

Biotecnología Aplicada, Vol. 18, No. 2, April 2001, pp. 109-111

Code Number: BA01022

Introducción

La necesidad del diagnóstico rápido y exacto de las enfermedades virales oportunistas se ha incrementado dramáticamente durante las últimas décadas, debido al uso creciente de drogas inmunosupresoras en la práctica médica, al descubrimiento del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), y al progreso en las investigaciones sobre las terapias antivirales. El paciente inmunocomprometido sufre un gran número de infecciones oportunistas.

Para un mejor manejo clínico y terapéutico de este tipo de pacientes, es preciso contar con herramientas útiles para el diagnóstico temprano y acertado de tales infecciones. Desde hace cinco años se continúan desarrollando líneas de investigación para asimilar tecnologías de diagnóstico avanzado: una reacción en cadena de la polimerasa (RCP) múltiple para todos los herpesvirus: VHS1 y 2, VEB, CMV, VVZ, HVH6, HVH7, HVH8, y una RCP para la detección y la tipificación de Chlamydia trachomatis y Papilomavirus.

Meningoencefalitis por los virus de la familia Herpesviridae

El aislamiento viral a partir del líquido cefalorraquídeo (LCR) es una técnica poco sensible para lograr el diagnóstico etiológico de las meningoencefalitis causadas por herpesvirus. Por ello, recientemente, se ha reportado el uso de la técnica de RCP para la detección e identificación de los diversos herpesvirus en pacientes con meningoencefalitis. Se introdujo una RCP múltiple que permite detectar todos los herpesvirus en un mismo tubo de reacción para el estudio de los LCR de pacientes con diagnóstico clínico de encefalitis o meningoencefalitis aguda o subaguda de probable etiología herpética y que fueron recibidos en el laboratorio de ETS del Departamento de Virología del IPK a partir 1996. De estos LCR, 182 correspondían a pacientes adultos seropositivos al VIH. El 22,5% de estos LCR resultaron positivos y el virus más frecuentemente encontrado fue el citomegalovirus (CMV) (13,7%), aunque en otras muestras se pudieron detectar otros herpesvirus (VZV, EBV, HVH6). También se constató la ocurrencia de infecciones múltiples en un mismo paciente. Este trabajo es de gran importancia para nuestro país, debido a que constituye el primer estudio etiológico de meningoencefalitis producidas por todos los herpesvirus. Además, permitió demostrar la sensibilidad superior de la técnica de RCP como herramienta rápida y efectiva para el diagnóstico molecular de esta entidad. El hecho de poder hacer el diagnóstico de los diferentes herpesvirus en una sola reacción de amplificación, ha permitido brindar un resultado en 24 h. De esta manera, se ha podido instaurar a tiempo la terapéutica específica, evitando así las secuelas y en muchos casos la muerte.

Monitoreo de la infección causada por herpesvirus en el paciente con trasplante de riñón

El trasplante renal constituye, en la actualidad, la herramienta terapéutica más eficaz para el tratamiento de la insuficiencia renal crónica en fase terminal. El rechazo al injerto y las infecciones constituyen las barreras más importantes para alcanzar el éxito del trasplante. Los herpesvirus, y fundamentalmente el CMV, constituyen los agentes virales que más se han reportado como causantes de morbilidad en este tipo de pacientes. Se realizó un estudio de prevalencia de anticuerpos contra los herpesvirus en la población de los pacientes hemodialisados del Instituto de Nefrología, cantera de los trasplantes renales, y se detectó que 100% de ellos tenía anticuerpos contra CMV y herpes simple (VHS), 95% contra el virus Epstein-Barr (VEB). Ninguno de estos pacientes era seropositivo al herpesvirus humano 8 (HVH8). Un grupo de trasplantados fue estudiado de forma evolutiva durante 16 semanas para hacer un seguimiento de la infección por herpesvirus. Se realizó el aislamiento de CMV a partir de orina, y una RCP múltiple para detectar genoma de los herpesvirus en plasma. Cincuenta y ocho por ciento de los pacientes resultaron positivos a la infección por CMV y 28% de este grupo mostró evidencias clínicas de enfermedad. El mayor número de pacientes con la infección por CMV se detectó entre la cuarta y la duodécima semana después del trasplante. De los individuos sometidos a una inmunosupresión alta, en 70% se puso de manifiesto la infección por CMV. Cincuenta por ciento del total de los pacientes en algún momento de su evolución clínica desarrolló episodios de rechazo al injerto, y en 83,3% de éstos la infección por CMV pudo ser diagnosticada, aunque la pérdida del órgano injertado o de la función renal en un período no mayor de un año posterior al trasplante, no pudo ser evitada. La RCP detectó las infecciones dos semanas antes que el aislamiento viral. Por primera vez en Cuba se confirma la infección por el herpesvirus humano 6 (HVH6) en este tipo de pacientes.

Detección de ADN del HVH8 en pacientes cubanos con sarcoma de Kaposi (SK) asociado al SIDA. Estudio de seroprevalencia HVH8 en diferentes grupos de la población cubana

Después del advenimiento del SIDA, el SK se ha convertido en la neoplasia más frecuente que desarrollan los pacientes con este síndrome. El SK aparece en 15 a 20% de ellos; sin embargo, raramente se observa en individuos inmunocompetentes. En el año 1994, Chang y colaboradores reportaron la identificación de secuencias de ADN similares a las de los herpesvirus, en tejidos de SK de pacientes con SIDA. El virus así descubierto se denominó virus del herpes humano 8 (HVH8) o herpesvirus asociado al sarcoma de Kaposi. En nuestro país, en los tres últimos años se ha venido observando un incremento en la aparición de casos de SK en los pacientes con SIDA (Departamento de Anatomía Patológica del IPK).

Se conoce muy poco acerca de la prevalencia y la distribución de la infección por el HVH8 en el Caribe. Para determinar la prevalencia de anticuerpos contra el HVH8 se estudiaron muestras de suero de 377 sujetos con alto y bajo riesgo de infecciones por el VIH y el HVH8. Entre los 25 pacientes con VIH y SK, 17 (68%) fueron seropositivos al HVH8. Treinta y dos de 154 (20,7%) pacientes seropositivos al VIH, pero sin SK, fueron también seropositivos al HVH8. En nuestro país, la detección de anticuerpos contra el HVH8 no estuvo asociada con las prácticas homo-bisexuales, porque estos anticuerpos se hallaron en gran parte de un grupo de individuos heterosexuales de ambos sexos que habían adquirido el VIH en África. Niveles muy bajos de anticuerpos contra el HVH8 fueron observados en donantes de sangre (1%), y no se encontraron en los receptores de trasplante renal.

Además, con el objetivo de demostrar la frecuencia de detección del HVH8 en los individuos con SK, se decidió emplear la técnica de RCP para estudiar las biopsias y las autopsias de un gran número de los pacientes con SK y SIDA diagnosticados en Cuba. Se procesaron 42 muestras de tejidos fijados con formalina y embebidos en parafina, pertenecientes a 25 pacientes, tomadas a lo largo de un período de 8 años (desde el año 1991 hasta 1998), y 13 sueros provenientes de mismo tipo de pacientes. Se incluyeron también en el presente estudio 10 lesiones de piel embebidas en parafina, derivadas de otras patologías dermatológicas no relacionadas con el SK y obtenidas de pacientes sin SIDA. Se logró detectar el ADN del HVH8 en 100% de los casos de SK estudiados, y no se detectó en las lesiones de piel no relacionadas con el SK. Por primera vez en Cuba se estableció el diagnóstico etiológico del SK en pacientes cubanos con esta neoplasia.

Prevalencia de Chlamydia trachomatis en mujeres infectadas con el VIH en Cuba

Se determinó la prevalencia y la distribución de las serovariedades de Chlamydia trachomatis (Ct) en 60 mujeres cubanas seropositivas al VIH. El genoma de Ct se detectó mediante una RCP que usa cebadores específicos de secuencia complementaria al gen de la proteína mayor de la membrana externa de Ct. Un por ciento de las muestras que resultaron positivas por RCP fue subsiguientemente sujeto a genotipificación, mediante el análisis por restricción enzimática del producto amplificado. El por ciento de prevalencia detectado fue de 10%, superior al compararlo con el del grupo control que fue de 6,6%. La serovariedad E fue la más frecuentemente detectada. Las mujeres con Ct, seropositivas al VIH, mostraron inflamación pélvica (EIP) como principal manifestación clínica (83,3%), seguida por cervicitis (50%). El presente estudio es el primer reporte en Cuba de prevalencia de Ct en mujeres infectadas por el VIH.

Estudio in vitro de la sensibilidad y la resistencia de cepas de herpes simple al Aciclovir y al Foscarnet

En la actualidad se dispone de una variedad de nuevos agentes antivirales, entre cuyas características principales se revelan su escasa toxicidad y su gran selectividad para el tratamiento de las infecciones producidas por el herpes simple. Sin embargo, el uso desmedido de estos compuestos ha conducido a la aparición de mutantes resistentes, fundamentalmente en pacientes inmunocomprometidos. Debido a la emergencia de tales mutantes, los ensayos de susceptibilidad antiviral in vitro han adquirido gran importancia.

Mediante un ensayo de reducción del efecto citopático en cultivo de células, se estudió la sensibilidad y la resistencia al Aciclovir y al Foscarnet, de 103 cepas del VHS aisladas entre 1992 y 1997 en el laboratorio de Enfermedades de Transmisión Sexual (Virología) del IPK. No se encontraron cepas resistentes al Foscarnet. Para 10,7% de las cepas se demostró su resistencia al Aciclovir y esta resistencia fue estadísticamente significativa para los pacientes seropositivos al VIH, en comparación con los seronegativos. La resistencia del VHS 2 fue estadísticamente significativa al compararla con la del VHS 1. Por primera vez en Cuba se confirma la presencia de cepas de herpes simple resistentes al Aciclovir, lo que alerta un cambio en la política de uso de estos antivirales fundamentalmente para el tratamiento de enfermedades en el paciente inmunocomprometido.

Infecciones por Papilomavirus humano en pacientes inmunocomprometidos

Las infecciones producidas por papilomavirus humano (PVH) se han convertido en un problema de salud mundial, principalmente en pacientes inmunocomprometidos. La mayor parte de los genotipos de PVH con alto potencial oncogénico se ha visto asociada, en estos pacientes, a procesos neoplásicos localizados en los tractos orofaríngeo y anogenital donde constituyen causa de tumores de rápida y fatal evolución.

En el presente trabajo se determinó la prevalencia de PVH en mujeres cubanas seropositivas al VIH, analizándose 60 muestras endocervicales mediante la técnica de RCP. La tipificación de los casos positivos se realizó utilizando un protocolo de hibridación no radioactiva (quimioluminiscencia ampliada) que permite detectar hasta 40 tipos diferentes de PVH. Se detectaron 33 muestras positivas para una prevalencia de 55%, que al compararlo con 23% de prevalencia en el grupo control estudiado resulta ser significativamente superior. Por primera vez en nuestro país se determina la prevalencia de infección por PVH en mujeres seropositivas al VIH, y se logra identificar tipos de PVH de muy alto potencial oncogénico y muy poco frecuentes en personas inmunocompetentes. Se describe coinfección con hasta siete tipos de PVH diferentes en una misma paciente.

También como parte de este estudio, se analizaron mediante RCP 40 muestras de tumores laríngeos embebidos en parafina procedentes de pacientes atendidos en servicios de oncología. Se detectó PVH 16 en 50% de los casos. Las lesiones tumorales detectadas en estos casos positivos fueron clasificadas anatomopatológicamente como carcinomas escamosos típicos y en todos estos pacientes se describen los antecedentes de consumo de alcohol y tabaquismo. Estos resultados aportan conocimiento acerca de los tipos de PVH que están circulando en este grupo de pacientes inmunocomprometidos, lo cual resulta novedoso en el país. Además, la detección de este agente en procesos neoplásicos reviste gran importancia con el fin de orientar conductas de prevención, control y tratamiento. Es por ello que la utilización de técnicas de avanzada para la detección y tipificación viral constituyen herramientas diagnósticas de gran valor para la orientación adecuada de las terapias clínicas y antivirales.

Conclusiones

Se realiza por primera vez el diagnóstico etiológico del sarcoma de Kaposi, así como un estudio de seroprevalencia de un nuevo herpesvirus (HVH8) en diferentes grupos de la población cubana. Se describe, por primera vez, en los pacientes cubanos con trasplante de riñón, la relación entre la infección por CMV, los episodios de rechazo al trasplante y la pérdida del órgano trasplantado. Se realizan, por primera vez en Cuba, los estudios de prevalencia de la infección por Chlamydia trachomatis y de la infección por papilomavirus, en pacientes seropositivas al VIH. Se detectan, por primera vez en el país, diferentes herpesvirus como los agentes etiológicos de meningoencefalitis, así como infecciones herpéticas múltiples del sistema nervioso central. Se confirma por primera vez la presencia de cepas de herpes simple resistentes al Aciclovir. Contar con un diagnóstico rápido y altamente sensible permite dar una respuesta diagnóstica efectiva, que redunda en una mejoría en la calidad de la vida del paciente inmunocomprometido y asegura la imposición de un tratamiento antiviral adecuado.