Biotecnologia Aplicada Elfos Scientiae ISSN: 0684-4551 Vol. 12, Num. 3, 1995, pp. 168-169

REPORTE CORTO / SHORT REPORT

ALGUNAS CARACTERISTICAS DE STICHOLYSINA, UNA NUEVA CITOLISINA DE Stichodactyla helianthus

C. Alvarez^1, M Tejuca^1, Vivian Morera^2, Vladimir Besada^2, F Pazos^1, R Veitia^1, M C Luzardo^1, A M Acevedo^1, Gabriel Padron^2 y M. E. Lanio^1

^1Departamento de Bioquimica, Fac. de Biologia, UH. ^2Centro de Ingenieria Genetica y Biotecnologia, Apartado Postal 6162. La Habana 6, Cuba

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A partir de los estudios de pH se pudo demostrar que la actividad hemolitica de la Sticholysina no depende de manera significativa, de su actividad fosfolipasica. En el presente trabajo se muestran otras caracteristicas moleculares y funcionales de esta citolisina y el estudio de la influencia de la fuerza ionica sobre el mecanismo hemolitico de Sticholysina.

INTRODUCCION

Sticholysina es un polipeptido basico (pI = 9,8), purificado de la anemona Stichodactyla helianthus de alrededor 18 kDa de masa molecular. Se caracteriza por una potente actividad hemolitica (H2C50 = 25-30 ng/mL) la cual es activada (Ca^2+, Mg^2+) o inhibida (Co^2+, Mn^2+) por diferentes iones divalentes y presenta una moderada actividad fosfolipasica y actividad anticoagulante (1, 2, 3). Otro factor que modula la actividad hemolitica (AH) es el pH del medio.

A partir de los estudios de pH se pudo demostrar que la AH no depende de manera significativa, de su actividad fosfolipasica (4). Resultados preliminares habian sugerido que el incremento de la fuerza ionica del medio provocaba un aumento de la AH (1). En el presente trabajo se muestran otras caracteristicas moleculares y funcionales de esta citolisina y el estudio de la influencia de la fuerza ionica sobre el mecanismo hemolitico de Sticholysina.

MATERIALES Y METODOS

La AH fue estimada como ha sido previamente informada (1). El perfil de hidropatia se trazo a partir de los estimados de Kyte y Doolittle (5). El curso temporal de la hemolisis fue determinado segun (6), a partir de la caida de la turbidez de una suspension eritrocitaria.

RESULTADOS Y DISCUSION

A partir de la secuencia aminoacidica de Sticholysina (8) se procedio a realizar el perfil de hidropatia del polipeptido. El analisis del perfil de hidropatia de la citolisina revela la presencia de una zona de Indice medio de hidrofobicidad positiva extendida a partir del aminoterminal, la cual se encuentra seguida de zonas alternas negativas y positivas para concluir en una zona negativa relativamente importante cercana al carboxilo terminal. Estos resultados indican la posible importancia de la region aminoterminal de la proteina en su insercion a la membrana, lo cual permitiria justificar molecularmente su elevada capacidad membranotropica.

Se determinaron los parametros cineticos que caracterizan la actividad fosfolipasica de este polipeptido (Km = 19 mM; Vm = 0.06 mU/mg y Kcat = 1.1 min-^1).

Por otra parte, en un sistema eritrocitos-liposomas se comprobo la capacidad fusogenica de esta citolisina mediante la incorporacion de la radioactividad asociada a los liposomas al sistema eritrocitario.

La fuerza ionica del medio provoco la agregacion de Sticholysina en solucion en estructuras oligomericas de mayor efectividad hemolitica. Tal agregacion tiene lugar de manera inmediata. Este proceso se favorece con la temperatura, al menos hasta 37^oC, lo cual apoya la hipotesis de que la formacion del oligomero esta mediada por interacciones hidrofobicas. La preincubacion de Sticholysina en un medio desprovisto de sales origina la perdida de su AH y esta se recupera por la adicion de fuerza ionica al medio de incubacion.

Estos resultados aportan nuevas evidencias sobre el mecanismo de accion de Sticholysina, en particular, sobre el importante papel de la fuerza ionica del medio sobre su actividad biologica, lo cual pudiera estar relacionado con los mecanismos de regulacion de su actividad en el entorno actual en que ejerce su funcion.

REFERENCIAS

1. TEJUCA, M. et al. (1994). Biologia 8(1).

2. VEIT A, R. et al. (1994). Biologia (en prensa).

3. D AZ, A. et al. (1992). Rev. Iberoamer Tromb Homeost. 5: 8-11

4. TEJUCA et al. (1994) Biologia (en prensa).

5. KYTE, J. and R. F.DOOLITTLE (1982) J. Mol. Biol. 157:105-132

6. HARSHAMAN, S. and N. SUGG (1985) Infect and Immunity 25:37-40.

7. KEM, W. and B. DUNN (1988). Toxicon 26 (11) 997-1008

8. MORERA, V. et al. (1994). Biotecnologia Habana 94. Libro de Resumenes.

Copyright 1995 Sociedad Iberolatinamericana de Biotecnologia Aplicada a la Salud