Biotecnologia Aplicada Elfos Scientiae ISSN: 0684-4551 Vol. 13, Num. 1, 1996

UTILIZACION DEL PCR PARA EL DIAGN STICO DEL VIRUS DE LA LEUCOSIS BOVINA EN CUBA

Savon L. C.,^1 Coroas L.,^1 Fernandez A. R.,^1 Corona B.,^1 Noda L.,^2 Barreras M.^2y Castell S.^2

^1 Departamento de Biologia Molecular.

^2 Departamento de Virologia. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). Apartado 10, San Jose de las Lajas, Cuba.

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Introduccion

El virus de la Leucosis Bovina (BLV) es un retrovirus tipo C que ocasiona linfosarcomas y linfocitosis persistente en terneros. Recientemente diversos autores han desarrollado la deteccion de ADN proviral y de secuencias de ARN de BLV mediante la reaccion en cadena de la polimerasa (l, 2, 3, 4, 5 y 6), debido a la importancia de poseer metodos que permitan realizar una eficiente deteccion, ofreciendo resultados no ambiguos y que puedan detectar precozmente la infeccion, lo que posibilitaria evitar el contacto de animales infectados con los que no lo estan, facilitando la erradicacion y control de esta enfermedad. El proposito de este trabajo es la introduccion del PCR en el diagnostico de la leucosis bovina en Cuba.

Materiales y Metodos

Las muestras de sangre, tomadas por puncion de la yugular se procesan y a partir de ellas se extrae el ADN linfocitario. Para la preparacion de las muestras directas se utilizo un procedimiento publicado en 1992 (7). La deteccion de anticuerpos en suero bovino se realizo mediante analisis ultramicroanalitico. En el ensayo de amplificacion utilizaron las condiciones descritas por Ballagi-Pordany (1).

Resultados y Discusion

En este trabajo se utilizaron en la amplificacion cebadores que flaquean la region que codifica para la glicoproteina de la envoltura gp5l. Se escogio esta region por ser altamente conservada en cepas provenientes de varios paises (1). Se amplifico, en las muestras positivas, un fragmento de la talla esperada. Los resultados en el caso de la amplificacion con muestras directas coincidieron con los obtenidos a partir de ADN linfocitario extraido de las mismas muestras. La prueba resulto especifica ya que no se obtuvo amplificacion al utilizar muestras de animales negativos a BLV. La ausencia de amplificaciones inespecificas se probo incorporandose en cada experimento una muestra control de agua y controles positivos y negativos. El uso de PCR brinda la ventaja de ser mucho mas sensible y brinda resultados,no ambiguos en cuanto al estatus real de la infeccion por BLV en adultos y recien nacidos (8). Tiene ademas la ventaja de no ser necesaria la purificacion de ADN para realizar el ensayo y que son necesarias solo pequenas cantidades de sangre (menos de 100 microL). El PCR debe utilizarse para investigar la prevalencia de BLV en terneros que van a ser utilizados para la produccion de sueros o vacunas, para detectar la presencia del virus en animales de importancia economica (ej. sementales) o como un metodo complementario y confirmatorio en la deteccion individual de infeccion por BLV en el ganado.

 1. Ballagi-Pordany A. et al. J Vet Med B.1992;39:69-77.
 2. Kuzmak J. et al. Acta Biochim Pol. 1991; 38:107-110.
 3. Kelly J. et al. Am J Vet Res 1993; 54:205-209.
 4. Murtaugh MP et al. J Vir Meth 1991; 33:73-85.
 5. Poon H. et al. J Vir Meth 1993;41:101-112.
 6. Sherman M. et al. J Clin Microb 1992; 30:185-191.
 7. BioFeedback. BioTechniques 1992; 13:522. 
 8. S-Agresti A. et al. Am J Vet Res 1993; 54:373-
377.

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