Biotecnologia Aplicada Elfos Scientiae ISSN: 0684-4551 Vol. 13, Num. 2, 1996

Obtencion de un biopreparado efectivo contra hongos fitopatogenos a partir de Pseudomonas Ps s como agente de control biologico

Pilar Villa^1 Ma. Elena Diaz de Villegas^1 Marusia Stefanova^2 y Odalys Zayas^1

1 Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Cana de Azucar (ICIDCA) Fax (537) 338236 E.Mail:icidca@ceniai.cu.

2 Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal (INISAV).

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Introduccion

En las ultimas decadas, los estudios relacionados con la eliminacion de enfermedades de las raices de las plantas, han estado centrados en las especies de pseudomonas fluorescentes, grupo Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida, y en los meca-nismos de accion que introducen en ello. Por tratarse de uno de los grupos de microorganismos mas importante en el control biologico, debido a los metabolitos secundarios producidos por las mismas entre los que se encuentran los sideroforos y antibioticos.

El objetivo del presente trabajo es la obtencion de un biopreparado a partir de Pseudomonas spp. Ps S efectivo contra hongos fitopatogenos.

Materiales y Metodos

Microorganismos y condiciones de cultivo

La cepa de Pseudomonas spp Ps S se selecciono por mostrar in vitro actividad antibiotica frente a hongos fitopatogenos en estudios realizados anteriormente. La misma se cultivo en erlenmeyers de 250 mL, conteniendo 50 mL del medio de cultivo Caldo AG14 conteniendo acido glutamico como fuente de carbono, en zaranda a 150 rpm, 30 C y pH 7; y en fermentadores Braun de 5 L de capacidad con una aereacion de 0,5 vvm y una agitacion de 175 rpm durante 54 horas.

Extraccion y purificacion del compuesto activo

La extraccion con acetona al 80 % y acetato de etilo se llevo a cabo a partir de los cultivos obtenidos en el medio AG1. La cromatografia HPLC de los extractos organicos se realizo en un equipo HPLC-64 Knauer.

Ensayos in vitro

La actividad antimicrobial del caldo libre de celulas y de las fracciones obtenidas por HPLC se determino por diferentes metodos contra los hongos fitopatogenos Phytophthora nicotianae, Sclerotium rolfsii, Macrophomina phaseolina y Thielaviopsis paradoxa Thp.

Resultados y Discusion

Se observo que la fase estacionaria se alcanzo a partir de las 6 horas de iniciado el cultivo, siendo la produccion de sideroforos minima, mientras que la produccion del compuesto con actividad antimicrobiana se incrementa a lo largo del cultivo mostrando el filtrado libre de celulas la inhibicion del desarrollo micelial del hongos Sclerotium rolfsii apartir de las 6 horas, con un 100 % de inhibicion a las 24 horas.

La efectividads del biopreparado in vitro contra los diferentes hongos fitopatogenos ensayados fue entre un 90 al 100 % de inhibicion del desarrollo micelial de los mismos. Las fracciones del compuesto activo purificado por HPLC fueron ensayados in vitro contra el hongo Thielaviopsis paradoxa, mostrando la mayor efectividad la fraccion 2.

Conclusiones

La cepa de Pseudonas spp Ps S tiene la capacidad de producir compuestos con actividad antimicrobiana efectiva contra hongos fitopatogenos.

Copyright 1996 Elfos Scientiae