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Biotecnologia Aplicada 1996 Volume 13 No. 3, pp.231- 237 LOS INTERFERONES: UN MODELO PARA EL DESARROLLO DE LA BIOTECNOLOGIA MODERNA EN CUBA
Jose de la Fuente, Alberto Agras y Luis Herrera Centro de Ingenieria Genetica y Biotecnologia. Apartado postal 6162, Ciudad de La Habana, Cuba.
Los Origenes El interferon (IFN) fue descubierto en 1957 por Alick Isaacs y Jean Lindenmann como mediador de la interferencia con los virus animales.
Los IFNs fueron clasificados originalmente en leucocitario, fibroblastoide e inmune atendiendo a su origen celular; posteriormente fueron categorizados en Tipo I y Tipo II de acuerdo con su comportamiento en acido (pH 2), calor (56 C) y propiedades antigenicas. Los IFNs leucocitario, fibroblastoide y linfoblastoide fueron agrupados en el Tipo I por su estabilidad ante acido y calor y el IFN inmune en Tipo II por su inestabilidad en estas condiciones. Finalmente, y debido a la heterogeneidad de las preparaciones de IFN, estos fueron clasificados en IFN alfa, beta (Tipo I) o gamma (Tipo II), basandose solamente en su antigenicidad.
El IFN alfa es la especie predominante producida por leucocitos estimulados por virus, mientras que los IFNs beta y gamma son producidos por fibroblastos o leucocitos inducidos con mitogenos o antigenos, respectivamente.
Los IFNs son sintetizados por celulas normales a niveles detectables cuando la sintesis es inducida. No obstante, existen evidencias de que ocurre expresion de IFNs Tipo I bajo condiciones fisiologicas. Despues de la induccion son secretados y actuan localmente o son distribuidos por todo el cuerpo a traves de la circulacion sanguinea. Al interactuar con los receptores para IFN presentes en la superficie celular, desencadenan diferentes funciones biologicas que incluyen accion antiviral y microbiana, inhibicion del crecimiento celular y tumoral, aumento y bloqueo de la produccion de IFN, aumento de la toxicidad y funciones inmunorreguladoras.
El clonaje del IFN beta fue reportado en 1979 por Taniguchi y colaboradores. En 1980 fue posible el clonaje del primer gen de IFN alfa: el IFN humano alfa1. Este clonaje se hizo en el laboratorio de C. Weissmann en Zurich. Utilizando el ADNc del IFN alfa1 como sonda para hibridizacion, un segundo IFN fue clonado, el IFN alfa2, distinto del IFN alfa1 en su estructura primaria y especificidad celular. Posteriormente se demostro la existencia de al menos otros 21 genes de IFN alfa. El gen del IFN gamma humano fue clonado en 1981 por el grupo de D. Goeddel en Genentech (EE. UU.).
Desde su descubrimiento, los IFNs fueron catalogados como balas magicas. Esta expectativa, aunque no se vio plenamente confirmada en la practica sirvio para la introduccion de estas moleculas en la clinica para el tratamiento de algunas afecciones virales y neoplasias, para el desarrollo de estudios de regulacion genica en mamiferos empleando estos genes como modelo y para el surgimiento de modelos de desarrollo de la biotecnologia moderna. El Nacimiento El desarrollo de la Ingenieria Genetica en Cuba tiene sus antecedentes mas directos en el Centro de Investigaciones Biologicas (CIB) donde se encuentran los grupos de Genetica Microbiana y de Biologia Molecular del Centro Nacional de Investigaciones Cientificas (CNIC), en el cual, a partir de 1978 se comenzo a reorientar la formacion de un grupo de investigadores para adquirir los conocimientos y crear condiciones a fin de efectuar un trabajo de Ingenieria Genetica en nuestro pais.
Ya en 1981 se comienza a obtener resultados metodologicos de base para el desarrollo de la Ingenieria Genetica a pesar de la escasez de materiales existente en aquellos momentos, la cual trajo como consecuencia la necesidad, en ciertos casos, de repurificar reactivos e incluso sintetizar algunos de ellos.
A principios de ano se logra la primera transformacion en la levadura Saccharomyces cerevisiae, lo cual amplio el campo de las investigaciones en el CIB y el CNIC. De igual forma se empieza con los preparativos para el aislamiento de genes de sus fuentes naturales. En marzo de ese ano se monta el protocolo de extraccion de ADN humano de leucocitos y unos meses mas tarde se purifica por primera vez ARNm de globina, lograndose su ensayo de actividad biologica por inyeccion en oocitos de ranas Xenopus laevis. A finales del mismo ano se estandarizan las electroforesis de ARN en agarosa-urea, el gradiente de sacarosa de ARNm de globina y se comienzan los primeros pasos de sintesis de ADNc.
Durante 1982 se realizan los primeros experimentos de marcaje de ARN con isotopos de iodo, sintesis exitosa de ADNc, tailing de ADNc de doble cadena de globina y se logra la purificacion de mas de 1 000 unidades de la enzima Terminal transferasa (Tdt), incluyendo los ensayos para la determinacion de endonucleasas y exonucleasas. En noviembre se sintetiza el primer oligonucleotido aplicando el metodo del triesterfosforico en solucion. Este fragmento de ADN de 15 bases se empleo en trabajos de identificacion y aislamiento de clones productores de IFN alfa.
-------------------------------------------------------------- El area de I/D estra estructurada de la siguiente manera: Divisiones de trabajo:
Vacunas Ensayos Preclinicos y Clinicos Immunotechnologia y Diagnostico Plantas y Fertilizantes Genetica de Celulas de Mamiferos Biotechnologia Industrial Quimica-Fisica
Desarrollo
Grupos multidisciplinarios de I/D - Produccion - Control -
En 1983 se logra la purificacion del ARNm del IFN leucocitario. El ARN de los leucocitos humanos fue extraido por el procedimiento de tiocianato de guanidinio y cloruro de guanidinio despues de la induccion de estas celulas con IFN leucocitario y virus Sendai. A partir de aqui el ARNm poli-A fue obtenido por cromatografia sobre oligo (dT) celulosa y fraccionado entonces sobre Sephacryl (300, 500 y 1 000). La actividad del ARNm del IFN fue determinada en extractos de oocitos de Xenopus laevis. En el ultimo trimestre se obtiene la primera biblioteca de ADNc a partir de la cual se comienza la busqueda del gen del IFN alfa2.
En abril de 1984 comienza a aplicarse satisfactoriamente el procedimiento de sintesis de oligonucleoticos en fase solida. La introduccion de esta tecnologia tuvo una gran repercusion en todo el desarrollo de las tecnicas de Ingenieria Genetica y por tanto en el avance de nuestros objetivos, dada la mayor eficiencia y productividad en el proceso que permitio la amplia difusion del uso a gran escala de estos pequenos fragmentos de ADN.
El gen del IFN alfa2 obtenido a partir de la biblioteca de ADNc fue clonado para su expresion bajo el control del promotor pr del bacteriofago de Escherichia coli en el plasmido vector pCQV-2. De esta forma se obtuvo en 1986 el plasmido pES-21, primera construccion genetica con la que se logro la expresion de esta proteina en E. coli aunque a bajos niveles. No obstante este logro inicial en bacteria, el IFN alfa2 humano ya habia sido expresado en Saccharomyces cerevisiae utilizando el sistema de secrecion del factor alfa, lo que constituyo la primera expresion en levaduras en Cuba. Este resultado de noviembre de 1984 tuvo el inconveniente de que la proteina era obtenida en forma glicosilada y con dos aminoacidos adicionales en el extremo N de su secuencia.
El primero de julio de 1986 se inauguro el Centro de Ingenieria Genetica y Biotecnologia (CIGB) como continuacion del trabajo desarrollado en el CIB.
En ese mismo ano se logro la expresion de la proteina con su composicion de aminoacidos correcta pero no fue posible eliminar la glicosilacion del producto final. Esta via fue desechada a pesar de su alto nivel de expresion.
Dada la eficiencia en la iniciacion de la transcripcion en E. coli del promotor ptrp del operon triptofano (trp) y nuestras primeras experiencias con la IL-2, el IFN beta y gamma, se trabajo a finales de 1986 y principios de 1987 en el acoplamiento de este promotor a la construccion anterior (pES- 21), formando un sistema genetico en el cual el gen codificante era transcrito a partir de ambos sitios de iniciacion colocados uno a continuacion del otro. Con esta experiencia se logro aumentar ligeramente la expresion del IFN alfa aunque todavia a niveles bajos.
En 1987 se logro elevar los niveles de expresion del IFN alfa humano suficientemente como para hacer un proceso de purificacion escalable y rentable. El gen codificante se clono bajo el control del promotor unico ptrp y da lugar al plasmido pTO-1, el cual fue mejorado al introducirle un fragmento portador de un terminador de la transcripcion del bacteriofago T4 en el extremo 3' del gen (pAG 11-3). A partir de este plasmido comienza el desarrollo final del proceso actual de purificacion a gran escala de esta proteina en el CIGB. El Desarrollo
Paralelamente al desarrollo de estos trabajos continuaron el montaje de metodologias basicas en el laboratorio, como fue el caso de la secuenciacion del ADN. En 1985 se estandarizo la secuenciacion por el metodo de Sanger para ADN de simple cadena y un ano mas tarde la secuenciacion de ADN de doble cadena, lo que hizo factible y facil un chequeo verdaderamente riguroso de nuestras construcciones geneticas finales. Partiendo de esta posibilidad en 1987 se realizo la secuenciacion del primer gen completo en nuestra institucion: el IFN alfa2 humano. De igual forma, en este ano se estandarizo la tecnica de mutagenesis dirigida por oligonucleotidos, aplicada tambien al gen del IFN alfa humano.
Con el objetivo de continuar mejorando los niveles de expresion en bacteria, se realizo el clonaje del gen en otros sistemas ya probados en el IFN gamma humano bajo los controles de los promotores lpp-lac-trp y pL-T4 sin obtenerse los resultados esperados; eran evidentes las significativas diferencias entre ambos genes de IFNs con respecto a sus procesos de transcripcion y traduccion. Se demostro mediante la utilizacion de programas elaborados en el CIGB para el analisis de estructuras secundarias que la posible estructura adoptada por el ARNm del IFN alfa2 humano no favorecia su traduccion por un involucramiento de las regiones Shine- Dalgarno y de inicio de la traduccion en estructuras de doble cadena por hibridaciones internas de esta zona. Sin embargo, esto no ocurre en el caso del IFN gamma humano. ----------------------------------------------------------- La estrategia de trabajo en I/D del CIGB esta encaminada a consolidar la posicion del CIGB en las diferentes areas mediante:
- Proyectos nuevos que aseguren la permanencia del CIGB en los mercados de las areas identificadas como prioridad. - Desarrollo de tecnologias que sean facilmente aplicables a otros objetivos de trabajo. Buscar liderazgo en algunas de estas tecnologias (ejemplo: transgenesis, expresion en levadura). - Busqueda de proyectos con mayor originalidad y posibilidades de patente, para lograr un balance entre componentes de investigacion basica y aplicada y entre proyectos a corto y largo plazo. - Desarrollar la capacidad necesaria a fin de incorporar el conocimiento mundial en las areas de trabajo del CIGB. Garantizar el desarrollo paralelo de todas las areas con sus particularidades y enfoques de mercado. - Utilizacion de grupos de I/D, Produccion, Control, Comercializacion para seguir los productos una vez que entren en las etapas finales de desarrollo (fases experimental- clinica) para buscar rapidez en el alcance del resultado final. - Identificar, financiar y atender de manera diferenciada los proyectos priorizados. - Analizar las debilidades e instrumentar medidas que conduzcan a su solucion.
El IFN fibroblastico humano o IFN beta fue la primera molecula expresada en Cuba en un hospedero heterologo a principios del ano 1983. Para ello se partio del gen cromosomal del IFN beta obtenido de una biblioteca humana en Charon 4-A y se clono en un pUC8 para obtener la proteina expresada a partir del promotor lac de este plasmido (pCB-101). Esta expresion fue mejorada entre 10 y 50 veces bajo el promotor trp a la vez que se lograba la expresion de la proteina con la composicion de aminoacidos correcta. Un aspecto importante de esta proteina es que al ser acoplada a un peptido senal, la actividad biologica obtenida (indice de expresion) fue cinco veces menor que sin esta region y sin ser exportada al espacio periplasmico, lo que parece resultar de un estacionamiento de la proteina en la membrana externa dada su alta hidrofobicidad. Esta proteina logro ser expresada hasta valores del orden de decenas de millones de unidades por mililitro de cultivo.
El IFN beta humano fue ademas expresado a bajos niveles en Bacillus subtilis en un intento por lograr su secrecion al medio de cultivo, aunque tampoco en este pudo ser detectado. En 1987, este gen fue expresado tambien en celulas de mamiferos. Para ello se realizo una construccion en la que se introdujo el fragmento HincII del IFN beta cromosomal humano bajo el control del promotor tardio mayor del adenovirus-2 (AdMLP) en el vector pAD23. Esta construccion (pAdbetaIF3) se transfecto y expreso en celulas CHO (dhfr- ).
En el periodo comprendido entre 1984 y 1985 se trabajo en tratar de lograr la estabilidad del producto a fin de evitar la formacion de dimeros, para lo cual se intento infructuosamente cambiar la primera cisteina de la proteina, la cual no participa en enlaces disulfuros, por una serina mediante mutagenesis dirigida. Este trabajo fue detenido en 1986 debido a la aplicacion cada vez menor del IFN beta en relacion, sobre todo, con los IFNs alfa y gamma. En 1995 se retomaron los trabajos debido a la aprobacion del IFN beta para el tratamiento de la esclerosis multiple.
El clonaje inicial del IFN gamma se realizo a finales de 1985 a partir de una libreria de ADNc en pUC9., El gen se inserta posteriormente bajo el control del promotor pL en el vector de expresion pAT12 y finalmente bajo el ptrp; primero sin la utilizacion de terminadores de la transcripcion y posteriormente introduciendo este, para dar lugar al plasmido conocido como pt5T5, con un nivel de expresion de mas del 10 % de la proteina total de la bacteria. En 1987 se clona este gen en el sistema lpp-lac de Inouye conjuntamente con el promotor ptrp y se eleva la expresion por encima del 20 % de la proteina total. Posteriormente se utiliza el sistema pL-T4 y se obtiene un nivel de expresion similar al anterior.
A finales de 1986 se logra por primera vez en los laboratorios del CIGB la purificacion del IFN alfa2 recombinante a partir del plasmido pES-21 en E. coli el cual expresaba la proteina intracelularmente y de forma insoluble. Este proceso inicial y la construccion genetica fueron mejorados, hasta la estandarizacion del proceso actual.
En febrero de 1988, se purifica a partir de E. coli y por primera vez, el IFN gamma humano (expresado intracelularmente en forma de cuerpos de inclusion). Para esto se utilizo un procedimiento similar al empleado en el caso del IFN alfa aunque sin el empleo de cromatografia de inmunoafinidad. Al no presentar puentes disulfuros esta proteina, su proceso de renaturalizacion y por tanto su purificacion son mas sencillos.
Entre agosto y octubre de 1987 se presentan los resultados de toda la caracterizacion del IFN alfa2 humano recombinante, en la cual se incluyo la verificacion completa de toda la secuencia y la presencia de los puentes disulfuros correctos de la proteina mediante espectrometria de masa y la secuenciacion completa por degradacion de Edman. En febrero de 1988 se caracteriza el IFN gamma humano recombinante por la misma tecnica. En la actualidad se continuan los trabajos de mejoramiento tanto de la expresion como del proceso de purificacion de los IFNs alfa2 y gamma humanos, ya sea en bacterias o en levaduras.
La aplicacion clinica de estas moleculas y especialmente del IFN alfa ha sido siempre un objetivo de trabajo y los centros de investigacion de Cuba han acumulado una gran experiencia en el uso terapeutico de los IFNs.
Desde 1986, investigadores del CIGB han realizado tambien valiosos aportes al estudio de la regulacion de la expresion de los IFNs alfa y beta en estrecha colaboracion con los mejores grupos del mundo en esta tematica. La Produccion Ya desde los primeros anos de vida del CIGB, la actividad productiva estuvo presente como una necesidad para la salida comercial de los productos recombinantes que se desarrollaban en sus laboratorios.
Los inicios de esta actividad tienen un antecedente: el Centro de Investigaciones Biologicas (CIB). Alli se producia desde 1981 IFN humano leucocitario. Esta produccion se llevo a gran escala a partir de donaciones de sangre.
En su concepcion inicial, el CIGB no contaba con una unidad productiva, sino con una unidad piloto, dedicada al desarrollo y estudios de escalado de las futuras producciones. La necesidad de salida rapida de producto hizo que esta concepcion se modificara y se contara en 1987 con una Unidad Productiva para la obtencion de IFN alfa humano recombinante procedente de E. coli.
A partir de esta primera unidad se siguio el proceso de remodelacion y preparacion de nuevas unidades. Actualmente, el CIGB cuenta con cuatro unidades productivas situadas en el edificio que fuera la unidad piloto con una capacidad fermentativa de 6 000 L. Estas divisiones productivas se dedican fundamentalmente a la fabricacion de ingredientes activos que son formulados y envasados en unidades del Centro Nacional de Biopreparados (CNB) y de la Industria Medico- Farmaceutica (IMEFA). Ademas se construyeron tres nuevas unidades de produccion, una de las cuales se encuentra en el Centro de Ingenieria Genetica y Biotecnologia de Camaguey, con una capacidad fermentativa de 500 L. En este ultimo se produce la vacuna contra la colibacilosis porcina (VACOLI). --------------------------------------------------------------
El CIGB tiene en el presente mas de 250 investigadores en I/D. Actualmente alcanza mas de 30 logros en I/D par ano y alrededor de 0,5 publicaciones/investigador/ano. El CIGB tiene aproximadamente 200patentes solicitadas en todo el mundo y mas de 100 otorgadas. Como resultado del trabajo de I/D integrado con las otras areas del CIGB se logaron 78 registros otorgados entre 1994 y 1995 con mas de 70 productos en venta.
En el CIGB se aborda la expresion de proteinas recombinantes en diferentes sistemas hospederos y en las siguientes areas: farmaceuticos, vacunas, plantas, animales, diagnosticos e industria. Tiene como linea de trabajo fundamental el empleo de la Ingenieria Genetica en todas las areas senaladas, incorporando elementos de caracterizacion de productos naturales (por ejemplo, el Factor de Transferencia) y estructura e ingenieria de proteinas para el diseno de peptidos y moleculas sinteticas. Las areas con mas desarrollo son las de farmaceuticos y vacunas debido a que tienen mas trabajo y recursos invertidos en ellas. Las otras areas son de mas reciente surgimiento y se han venido desarrollando con rapidez. --------------------------------------------------------------
El producto pionero de la industria biofarmaceutica recombinante cubana fue el IFN alfa2b humano recombinante, producido a escala de laboratorio en el CIB a partir de 1985 y mas tarde a escala industrial en el CIGB. Esta proteina fue el resultado del esfuerzo de un grupo de jovenes cientificos y tecnicos del CIB, quienes trabajaron consagradamente tras un objetivo: demostrar las potencialidades y posibilidades de la Ingenieria Genetica y la Biotecnologia para nuestro pais.
A partir del establecimiento de esta primera produccion recombinante se logran las que incluyen vacunas, factores de crecimiento, linfoquinas, anticuerpos monoclonales, enzimas de restriccion/modificacion y juegos diagnosticos entre otras (Tabla 1).
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Tabla 1. Proteinas producidas en el CIGB.
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Producto Proteina Fuente Comienzo
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Heberon alph Interferon Leucocitos 1981
N * alfa natural humanos
Enzimas de Diferentes enzimas Diferentes cepas 1985
Restriccion/
Modificacion *
Hebertrans * Factor de Leucocitos 1986
transferencia humanos
(extracto dializable de leucocitos)
Heberon alfa R Interferon alfa 2b E. coli 1987
recombinante
Anticuerpos Diferentes AcMs Hibridomas 1987
monoclonales murinos
Juegos Antigenos E. coli y otras 1987
diagnosticos recombinantes
Hebermin Factor de crecimiento S. cerevisiae 1987
epidermico recombinante
Heberkinasa Estreptoquinasa E. coli 1991
recombinante
Heberbiovac HB Antigeno de superficie P. pastoris 1991
del VHB recombinante.
(HBsAg-r)
Gavac Antigeno Bm86 P. pastoris 1993
recombinante (membrana
intestinal del B. microplus)
Vacoli Antigenos K88ab y K99 E. coli 1993
recombinantes
Interleukina-2 Interleukina-2 E. coli 1995
recombinante
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Tabla 1. (continued)
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Producto Uso
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Heberon Humano-inyectable: Tratamiento de infecciones
alfa N * virales: virus papiloma humano, hepatitis viral
B y C, herpes zoster, VIH. Neoplasias malignas,
tumores solidos, etc.
Enzimas de Para uso en Biologia Molecular
Restriccion/
Modificacion *
Hebertrans * Humano-inyectable: Tratamiento de individuos
con inmunodeficiencia celular, Herpes zoster,
Herpes simple, ninos con infeccion herpetica
mucocutanea recidivante e inmunodeficiencia
celular, queratitis herpetica, ataxia
telangiectasia, etc. Enfermedades de origen
alergico o autoinmune
Heberon Humano-inyectable: Tratamiento de infecciones
alfa R virales, neoplasias malignas, tumores solidos,
etc.
Anticuerpos Ligando para la inmunopurificacion de IFN y
monoclonales HBsAg. AcMs para juegos diagnosticos
Juegos Para uso en juegos diagnosticos
diagnosticos
Hebermin Humano-uso topico: Tratamiento de quemaduras,
ulceras y lesiones de radioterapia
Heberkinasa Humano-inyectable: Tratamiento del infarto
agudo de miocardio, trombosis venosa profunda,
embolia pulmonar, oclusion arterial, etc.
Heberbiovac Humano-inyectable: Vacuna para la inmunizacion
HB activa contra la infeccion producida por el
virus de la hepatitis B (VHB)
Gavac Veterinario-inyectable: Vacuna para la
inmunizacion activa de los bovinos contra la
garrapata B. microplus
Vacoli Veterinario-inyectable: Vacuna para la
inmunizacion activa y pasiva contra la
colibacilosis porcina, de lechones lactantes y
recien destetados
Interleukina-2 Humano-inyectable: Tratamiento del cancer
* Producciones que comenzaron en el Centro de Investigaciones
Biologicas (CIB)
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Actualmente la Subdireccion de Produccion de Biofarmaceuticos y Veterinarios cuenta con una estructura tecnico-organizativa asi como con un personal altamente calificado con experiencia en producciones biotecnologicas y biofarmaceuticas.
Esta Subdireccion tiene mas de 380 trabajadores distribuidos entre 15 Divisiones que a su vez producen nueve proteinas recombinantes para uso farmaceutico humano y veterinario, dos proteinas naturales para uso farmaceutico, mas de 25 enzimas de restriccion/modificacion, mas de 30 anticuerpos monoclonales para uso en inmunopurificacion. Ademas cuenta con personal especializado en desarrollo de proyectos ingenieros para la instalacion y validacion de plantas biotecnologicas.
Ademas de las diferentes divisiones de produccion se encuentran otras como la Division de Control de Procesos (centraliza la actividad analitica necesaria para el control de las diferentes unidades productivas), la Division de Formulacion y Envase (asegura toda la actividad relacionada con la etapa final de formulacion, envase y embalaje de todos los productos), la Division de Ingenieria, (garantiza la operacion de la Planta de Produccion y elabora los proyectos tecnicos), la Division de Validacion (proyecta y realiza toda la actividad de validacion de procesos de las diferentes unidades), y la Division de Desarrollo Biofarmaceutico (realiza los trabajos de escalado, implementacion productiva, validacion, entre otros, de los nuevos productos que estan en fase final de Investigacion/Desarrollo (I/D) y entran en la fase de explotacion comercial).
Ademas de la Planta de Produccion de Biofarmaceuticos y Veterinarios, existe una unidad de Produccion de Inmunorreactivos y Juegos Diagnosticos.
En los primeros anos del comienzo de la actividad productiva existia un Laboratorio de Control de Calidad bajo la direccion de Produccion y su funcion era controlar analiticamente el proceso y los productos finales que salian de la planta. A partir de 1990 se crea la Subdireccion de Calidad independiente de la Division de Produccion, con el objetivo de certificar la calidad de los productos. De esta forma se comienza la implantacion de Buenas Practicas de Produccion (BPP) y Buenas Practicas de Laboratorio (BPL) para los procesos establecidos y un entrenamiento riguroso de todo el personal comprometido con el area productiva.
Esta Subdireccion esta formada por la Division Analitica (estan incluidos el desarrollo de los materiales de referencia, la validacion de los metodos analiticos y el desarrollo de los estudios de estabilidad) y la Division de Aseguramiento de la Calidad con la tarea de preparar e impartir cursos de entrenamiento para todo el personal relacionados con BPP, BPL, Sistema de Calidad, ISO 9000, etc. Ademas realizo la confeccion del Manual de Calidad y el trabajo de implantacion de un sistema de calidad de acuerdo con las Normas Internacionales de la serie ISO 9000. Durante estos anos se ha trabajado en la calibracion y el control de los medios de medicion, inspecciones y auditorias, asi como en el tratamiento de las no conformidades.
La Division Analitica esta compuesta por los Departamentos de Inmunoquimica, Ensayos Biologicos I, Ensayos Biologicos II, Microbiologia, Biologia Molecular, Cromatografia, Electroforesis, Analisis Quimico, Sistemas Criticos, Recepcion y Manipulacion de Muestras y Desarrollo de Tecnicas Analiticas. La Division de Aseguramiento de Calidad esta formada por los Departamentos de Inspeccion y Auditoria, Seguridad Ocupacional, Ingenieria de Calidad, Documentacion de Registros y Regulaciones, Liberacion, Metrologia y Validacion.
La incorporacion de estas divisiones ha ayudado a pasar satisfactoriamente las inspecciones realizadas a cuatro de nuestros principales productos: (Heberbiovac HB (vacuna recombinante contra la hepatitis viral tipo B), Heberon alfa R (IFN alfa2), Heberkinasa y Hebermin) por el Centro Estatal para el Control de los Medicamentos (CECMED), autoridades sanitarias de Rusia en 1991 y Argentina en 1993, ademas de las realizadas por Iran y Mexico para la vacuna Heberbiovac HB. De esta forma los productos del CIGB han sido evaluados por comisiones de diferentes paises que han comprobando su calidad. Ademas, han sido ampliamente utilizados tanto en Cuba como en el extranjero. Los volumenes de exportacion son fundamentalmente a paises de America Latina, Asia, Medio Oriente y Europa Oriental. Estos son comercializados por la empresa Heber Biotec S.A.
Por ejemplo, en el caso de los IFNs, todas las aplicaciones descritas mundialmente para este producto han sido probadas en pacientes cubanos, e inclusive, se han tratado enfermedades por primera vez en nuestro pais como por ejemplo el virus del dengue, el virus de papilomas y la esquizofrenia. Durante 1981, el IFN leucocitario (Heberon alfa N) fue utilizado ampliamente para el tratamiento de las epidemias de dengue hemorragico y conjuntivitis hemorragica.
En el caso del tratamiento de las hepatitis B fulminantes se pudo demostrar que el IFN, tanto natural como recombinante, sirvio para disminuir los casos de muerte y aumentar la prognosis de los casos cronicos. Actualmente se usa uniformemente en el tratamiento de los casos de hepatitis B en todo el pais.
En nuestro pais el IFN ofrecio un nueva espectativa a los enfermos de papilomatosis laringea, una enfermedad que afecta principalmente a ninos y cuyo unico tratamiento era la intervencion quirurgica continua, inclusive, con necesidad de traqueostomias. El tratamiento con IFN hace controlable esta enfermedad. Desde 1983 nuestro sistema de salud cuenta con un programa nacional para su tratamiento.
Actualmente se desarrollan protocolos de estudios clinicos con IFN en pacientes portadores del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH). Algunos resultados demuestran retardo en la aparicion del Sindrome de la Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA), asi como disminucion de infecciones oportunistas. Tambien ha sido utilizado ampliamente en neoplasias de diferente indole como por ejemplo, en el tratamiento de sarcoma de Kaposi, cancer de pancreas, de esofago, de colon, entre otros.
En total hasta 1993 se habian tratado con IFN mas de 1 500 casos en estudios clinicos documentados. Hoy, un numero mucho mayor de enfermos en nuestro pais ha recibido IFN como tratamiento.
El trabajo con los IFNs permitio formar un grupo de investigadores capaces de desarrollar todo el proceso investigativo desde el laboratorio hasta la introduccion clinica empleando las mas modernas tecnicas de Ingenieria Genetica y Biologia Molecular. Los IFNs fueron nuestro modelo de desarrollo y el primer exito. Otro de nuestros productos importantes es la estreptoquinasa recombinante. Este producto antitrombolitico sirve para el tratamiento del infarto, principal causa de muerte en Cuba y otros paises. La estreptoquinasa ha demostrado la reduccion de la mortalidad aproximadamente en un 23 % de los pacientes que la usan. Actualmente su uso se ha extendido nacionalmente a 52 hospitales y se ha utilizado en mas de 3 000 pacientes (Figura 1).
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