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Biotecnología Aplicada 1998;15:180-182 EVALUACIÓN DEL SISTEMA DIAGNÓSTICO AUBIODOT ANTI-HIV 1/2 *Gricel López, Esther Argote y Otto Cruz Banco Provincial de Sangre de Ciudad de La Habana, calle 23 No. 954, e/ 2 y 4, Vedado, Ciudad de La Habana, Cuba. Telf: (53-7) 30 1030, 30 3800, 30 3111-13. Recibido en septiembre de 1997. Aprobado en noviembre de 1997. Code Number: BA98029 ABSTRACT The AuBioDOT anti HIV 1/2 system was evaluated against 444 sera of HIV-1 and HIV-2 no reactive blood donors, 135 positive to HIV-1 and 9 positive to HIV-2. Using Western blot (DAVIH blot and DAVIH blot II) as the reference test, the specificity obtained was 98.88 % (97.41 % - 99.50 %; CL 95 %) and the sensitivity was 100 % (97.43 % - 100.00 %). The positive predictive values were 0.53 % and 85.07 % for HIV infectious prevalence of 0.006 % and 6 % respectivily, and the negative predictive values were 100 % for both prevalences. Based on both, the obtained results and handling characteristics, the system is recommended for the screening in laboratories that process limited numbers of samples as well as for the diagnosis of HIV infection in different health care levels, especially in areas with lower laboratory conditions. Key words: HIV, diagnostic, immunoassay RESUMEN El sistema AuBioDOT anti HIV 1/2 fue evaluado frente a 444 sueros de donantes de sangre no reactivos al VIH-1 y VIH-2, 135 positivos al VIH-1 y 9 positivos al VIH-2. Usando Western blot (DAVIH blot y DAVIH blot II) como prueba de referencia, la especificidad obtenida fue del 98,88 % (97,41 % - 99,50 %; LC 95 %) y la sensibilidad del 100 % (97,43 % - 100,00 %). Los valores predictivos positivos fueron del 0,53 % y 85,07 % para prevalencias de la infección del VIH de 0,006 % y 6 % respectivamente, y los valores predictivos negativos fueron del 100 % para ambas prevalencias. Por los resultados obtenidos en la evaluación y las características operacionales del sistema se recomienda su uso para el pesquisaje en laboratorios que procesan cantidades limitadas de muestras y para el diagnóstico de la infección por VIH en diferentes niveles de salud, principalmente en áreas con condiciones mínimas de laboratorio. Palabras claves: VIH, diagnóstico, inmunoensayo Introducción Con el desarrollo de los medios diagnósticos para la detección de anticuerpos a diferentes enfermedades se emplean cada vez más los sistemas simples, rápidos, de fácil ejecución, de interpretación visual y con requerimientos mínimos de laboratorios. Diversos autores reportan evaluaciones de estos sistemas donde se obtiene valores de sensibilidad y especificidad comparables con los ensayos inmunoenzimáticos tipo ELISA, (1-6). En Cuba se producen sistemas diagnósticos simples para la detección de anticuerpos al VIH, tales como el AuBioDOT anti HIV 1/2 producido por el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB) y el DAVIH DOT VIH-1 producido por DAVIH Laboratorios, los cuales han obtenido valores de sensibilidad y especificidad similares a otros de su tipo. En este trabajo se muestran los resultados de la evaluación realizada al sistema AuBioDOT anti-HIV 1/2, en el Laboratorio de Control de Calidad del Laboratorio de Referencia Nacional de Retrovirus (LRN), de Cuba. Materiales y Métodos Se emplearon 144 sueros de cubanos VIH positivos pertenecientes a un panel de referencia del LRN; de ellos 135 positivos a VIH-1 y 9 al VIH-2. También se estudiaron 444 muestras frescas de donantes de sangre no reactivas al VIH-1 y VIH-2 por el sistema diagnóstico UMELISA HIV Recombinant 1+2, producido por Centro de Inmunoensayo (CIE) de Cuba. Para la confirmación y estudio de las discrepancias se utilizó la prueba suplementaria de Western blot con los estuches DAVIH blot y DAVIH blot II, elaborados por DAVIH Laboratorios de Cuba, para la detección del VIH-1 y VIH-2, respectivamente. La evaluación del sistema diagnóstico AuBioDOT anti-HIV 1/2 de tipo indirecto (que utiliza proteínas recombinantes gp120, gp41 y p24 del VIH-1, gp36 del VIH-2 e inmunosondas de oro amplificadas con reveladores de plata) se efectuó siguiendo estrictamente las indicaciones del fabricante contenidas en el estuche. Principios del método del ensayo El inmunoensayo consiste en el uso de soportes de poliestireno blanco - opaco con ligeras hendiduras de forma circular, donde se encuentran adsorbidos los antígenos recombinantes de regiones representativas de los genes que codifican para las proteínas de envoltura gp-120 y gp-41 y la proteína central p-24 del VIH-1; y para la proteína gp36 de envoltura del VIH-2. Las muestras prediluidas con una solución reguladora, son incubadas en dichas excavaciones y en presencia de anticuerpos específicos, los mismos reaccionan con las proteínas virales inmovilizadas sobre la matriz sólida. Después del lavado para eliminar los anticuerpos no especificos, los inmunocomplejos fijados son reconocidos a través de la región Fc de las inmunoglobulinas implicadas, por la adición del conjugado de proteína A (recombinante)- oro coloidal. Después de una breve etapa de lavado, la reacción es finalmente amplificada por la adición de reveladores físicos basados en iones de plata, y se produce in situ reacciones coloreadas insolubles, de color pardo claro a oscuro, cuya intensidad es proporcional a la concentración de anticuerpos presentes en las muestras. La lectura se realiza directamente mediante simple inspección visual, y las placas pueden ser conservadas para el registro permanente de los resultados. La especificidad y sensibilidad se calcularon según los métodos convencionales (7, 8) y se evaluó con un límite de confianza de un 95 %, para lo cual se empleó la fórmula binomial de probabilidad (9). Para determinar la sensibilidad analítica se realizaron diluciones seriadas de un suero positivo al VIH-1 (de 1/10 a 1/10 240), las que fueron caracterizadas por DAVIH blot. Los valores de repetibilidad se obtuvieron con 24 muestras en las que se compararon los resultados obtenidos en dos ensayos diferentes. Los valores predictivos positivos (VPP) y negativos (VPN) se calcularon según las siguientes fórmulas establecidas por el Teorema de Bayes (9, 10): PS
VPP = ---------------- x 100
PS + (1-P) (1-E)
(1-P) E
VPN = ----------------- x 100
(1-P) E + P (1-S)donde: P, prevalencia; S, sensibilidad y E, especificidad Para estos cálculos se utilizó tanto la prevalencia real de nuestro país (0,006 %) como la del 6 % que ha sido utilizado en otros estudios (11, 12). Los sueros con resultados discrepantes fueron evaluados por Western blot (DAVIH blot y DAVIH blot II); los resultados indeterminados no se tuvieron en cuenta para el cálculo de la sensibilidad y especificidad. El criterio mínimo de positividad utilizado en este sistema coincide con el de la OMS, el cual considera como muestra positiva aquella que presenta anticuerpos al menos a dos glicoproteínas codificadas por el gen ENV (13). Resultados y Discusión Los 144 sueros de personas VIH positivas (135 VIH-1 y 9 VIH-2) fueron clasificados correctamente por el sistema estudiado, por lo que la sensibilidad del AuBioDOT anti-HIV 1/2 fue de un 100 % (97,43 - 100). De las 444 muestras de donantes de sangre estudiadas, diez fueron clasificadas inicialmente como positivas débiles o dudosas, y seis fueron repetidamente positivas débiles, de estas últimas cinco fueron negativas por WB y una indeterminada al VIH-1 (por la presencia de la proteína p53), con ello se obtuvo una especificidad de 98,88 % (97,41 - 99,50). Los valores de sensibilidad y especificidad obtenidos en esta evaluación superan los declarados en las indicaciones del fabricante (99 % de sensibilidad y 98 % de especificidad) y son comparables con los resultados alcanzados por otros sistemas diagnósticos simples en evaluaciones de la Organización Mundial de la Salud (14), Tabla 1. Tabla 1. Comparación de la sensibilidad y especificidad del AuBioDOT anti-HIV 1/2 y otros sistemas de su tipo evaluados por la OMS.
El sistema alcanzó el 100 % de repetibilidad al obtenerse resultados similares para las 24 muestras evaluadas en dos ensayos diferentes. Los resultados de la sensibilidad analítica se muestran en la Tabla 2. AuBioDOT anti HIV 1/2 y DAVIH blot mostraron la misma sensibilidad para diluciones de un suero positivo hasta 1/160. A diluciones mayores el suero se clasificó como indeterminado por DAVIH blot, y como positivo débil por AuBioDOT anti HIV 1/2, por lo que este último fue capaz de identificar como positivas muestras con escasa reactividad. Tabla 2. Resultados de la sensibilidad analítica del sistema AuBioDOT anti-HIV 1/2.
S/D: sin diluir, P: positivo, I: indeterminado, :débil, *: muy débil. Al calcular los valores predictivos se encontró que para una prevalencia de la infección de VIH de 0,006 % sólo el 0,53 % de los resultados positivos fueron verdaderamente positivos, mientras que para una prevalencia de 6 % el valor predictivo positivo alcanzó el 85,07 %. Para ambas prevalencias el valor predictivo negativo fue del 100 %. Estos resultados coincidieron con los obtenidos por el sistema de ELISA RECVIH (que al igual que el AuBioDOT anti-HIV 1/2 es un ensayo de segunda generación, producido por el CIGB), el cual obtuvo valores predictivos de 0,9 y 88,12 % para prevalencias de 0,006 y 6 %, respectivamente (12). Por los resultados obtenidos en la evaluación y las características operacionales, el sistema AuBioDOT anti-HIV 1/2 es recomendable para su uso en laboratorios que procesan cantidades limitadas de muestras y para el diagnóstico de la infección por VIH en diferentes niveles de salud, principalmente en áreas con condiciones mínimas de laboratorio (servicios de urgencia, clínicas estomatológicas, puestos médicos rurales, etc.). Referencias
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