|
Zootecnia Tropical
Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas Venezuela
ISSN: 0798-7269
Vol. 24, Num. 1, 2006, pp. 43-53
|
Zootecnia Tropical, Vol. 24, No. 1, 2006, pp. 43-53
Actividad antimicrobiana
de propóleos provenientes de dos zonas climáticas del estado Miranda,
Venezuela. Efecto de la variación estacional
Antimicrobial activity
of propolis from two climatic zones in Miranda state, Venezuela.
Seasonal variation effect
Antonio J. Manrique
Universidad
Nacional Experimental Rómulo Gallegos
Área de Agronomía. San Juan de los Morros, Guarico. Venezuela
Recibido:
16/08/05
Aceptado: 21/02/06
Code Number: zt06004
RESUMEN
Se colectaron muestras
de propóleos provenientes de dos apiarios del estado Miranda,
Venezuela, ubicados en diferentes zonas de vida. La primera localidad se
ubica en un bosque húmedo premontano en el Municipio Guaicaipuro y la
segunda en un bosque seco tropical en Guatire, Municipio Zamora, desde
octubre de 2001 hasta septiembre de 2002. El objetivo del experimento
fue evaluar la actividad antimicrobiana de los propóleos colectados y
la influencia estacional, en dos zonas de vida. Para el análisis de los
datos, se empleó un modelo mixto basado en mediciones repetidas en el
tiempo, en cada localidad estudiada y se aplicó la prueba de media de
Tukey. Todos los extractos etanólicos de propóleos (EEP) estudiados
mostraron actividad antimicrobiana, al inhibir el crecimiento del Staphylococcus
aureus ATCC 25.923 con halos de inhibición de hasta 30 mm y del Micrococcus
luteus ATCC 9.341. Las muestras de EEP recolectadas en Guatire en
enero y las de enero y julio de El Laurel mostraron mayor actividad
antimicrobiana. Los resultados sugieren que los propóleos estudiados
muestran influencia estacional en la inhibición del crecimiento
bacteriano y que los EEP pueden ser usados como agentes antimicrobianos
contra S. aureus y M. luteus.
Palabras clave: propóleos, Venezuela, actividad antimicrobiana.
Summary
Propolis samples were
collected from apiaries at two locations in Miranda state, Venezuela,
located in different life zones. The first location is at a humid
premountain forest in Guaicaipuro Municipality and the second is at a
dry tropical forest in Guatire, Zamora Municipality, from October 2001
to September 2002. This assay was carried out to evaluate the seasonal
influence and the antibacterial activity by the propolis collected in
both life zones. The data were analyzed through a mixed model based on
repeated measures in each location and means separated by the Tukey
test. All ethanolic extracts of propolis (EEP) showed antimicrobial
activity inhibiting growth of Staphylococcus aureus ATCC 25.923,
with an inhibition halo up to 30 mm, and Micrococcus luteus ATCC
9.341. EEP samples collected from Guatire in January and from El Laurel
in January and July exhibited the highest antibacterial activity. The
results suggest that the studied propolis showed seasonal influence in
the inhibition of bacterial growth and that EEP could be used as
antimicrobial agents against S. aureus and M. luteus.
Keywords: propolis, Venezuela, antimicrobial activity.
INTRODUCCIÓN
El propóleos es
utilizado para producir apiterápicos de uso humano y animal, debido a
sus propiedades biológicas. En el primer libro médico, "Libro de
preparación de medicamentos para todas las partes del cuerpo
humano", en el papiro de Ebers (hace mas de 1700 años AC), se
menciona el propóleos como medicina (Asís, 1993). No obstante, fue en
la guerra de los Boers en Sudáfrica, a finales del siglo 19 cuando tuvo
su mayor aplicación para el tratamiento de heridas y como cicatrizante
(González y Bernal, 1997). El embalsamado de intrusos dentro de la
colmena para contener la putrefacción y evitar enfermedades en su
interior es una prueba de sus cualidades. En el interior de la colmena
hay una alta densidad poblacional, hasta 90.000 abejas, temperaturas de
34ºC, intercambio y almacenamiento de alimentos, condiciones ideales
para el crecimiento de microorganismos nocivos para las abejas; sin
embargo, la presencia de substancias antimicrobianas del propóleos
inhibe su proliferación.
Levy (1999) sugiere que
el mecanismo de la actividad antimicrobiana del propóleos es complejo y
puede ser atribuido al sinergismo entre algunos de sus compuestos, tales
como flavonoides, ácidos aromáticos, ácidos grasos, ésteres,
hidroxiácidos, sesquiterpenos y otros compuestos fenólicos presentes
en su composición. Vargas et al. (2004) reportan que los EEP
mostraron actividad antimicrobiana contra una serie de bacterias
resaltando la inhibición de 45 aislados de Staphylococcus sp.
Varios autores han demostrado que la actividad antibacterial del
propóleos contra Enterococcus sp, Escherichia coli y,
especialmente, contra Staphylococcus aureus (Kujumgiev et al.,
1999, Hegazi y El Hady 2002.)
Las propiedades
antimicrobianas de esta resina pueden ser atribuidas, principalmente, a
los flavonoides, como la pinocembrina, galangina, pinobanskina y al
éter bencil del éster fenetil de ácido caféico, el cual es un
componente activo del propóleos que ejerce gran variedad de cambios
biológicos en diversos sistemas, como las respuestas inmunomoduladoras,
antiinflamatórias, y antimitogénicas (Lefkovits et al., 1997),
ácido p-cumárico y éter del ácido caféico (Amoros et al.,
1992).
Moura et al.
(1999b) encontraron que los propóleos de las abejas africanizadas
presentaron mayores halos de inhibición contra el S. aureus que
los de abejas europeas. Similarmente, Pereira (1999) observó que el
propóleos no tiene actividad antibacteriana contra cepas Gram
negativas, pero sí contra todas las cepas Gram positivas.
Sforcin et al.
(2000) señalan que la actividad antimicrobiana del propóleos es el
reflejo de sus constituyentes, los cuales pueden variar su composición
química, dependiendo de la región y de la estación que sea
recolectado. Por otro lado, Orsi et al. (2005) demostraron el
efecto bactericida del extracto etanólico de propóleos (EEP) contra la Salmonella enteritidis y S. typhimurium, concluyendo que
el poder bactericida del propóleos contra bacterias Gram negativas
puede variar de acuerdo a la región geográfica donde sea producido.
Chaillou et al. (2004) estudiaron propóleos argentinos y
encontraron que en el 50% de las muestras se inhibieron en más de 12 mm
cepas de S. aureus, concluyendo que el diámetro del halo de
inhibición depende del contenido de flavonoides de los EEP utilizados.
No obstante, Manrique y Santana (2004) trabajaron con EEP de Melipona
quadrifasciata, Tetragonisca angustula y Nannotrigona sp. y obtuvieron halos de inhibición entre 11 y 25 mm contra las
bacterias S. aureus ATCC 25.943 y Micrococcus luteus ATCC
9.341, aun cuando los EEP mostraron porcentajes muy bajos de
flavonoides, variando de 0,19% a 0,32% y con elevada actividad
antioxidante, de 3 a 5 segundos en promedio
Los propóleos de
Alemania y de Egipto mostraron mayor actividad antibacteriana contra S.
aureus, mientras que los de Alemania, Egipto y de Mongolia fueron
mas efectivos contra la Candida albicans (Hegazi y El Hady,
2002).
El objetivo del
presente trabajo fue estudiar la propiedad antimicrobiana de propóleos
de abejas híbridas africanizadas (Apis mellifera L.)
provenientes de dos regiones climáticas diferentes del estado Miranda,
Venezuela y verificar si existe influencia estacional en esta
característica.
MATERIALES Y MÉTODOS
El experimento fue
realizado de octubre de 2001 a septiembre de 2002, donde se colectaron
muestras de propóleos en apiarios ubicados en la Estación Experimental
"Jaime Henao Jaramillo" (El Laurel) de la Universidad Central
de Venezuela, Cortada del Guayabo, Municipio Guaicaipuro y en Guatire,
Municipio Zamora, ambos en el estado Miranda, Venezuela. La primera
región se encuentra enmarcada dentro de la zona de vida del bosque
húmedo premontano, cuyas características climáticas fueron descritas
por Manrique y Thimann (2002) y la segunda localidad dentro del bosque
seco tropical, situado a 10o 01` N y 62o 15` O a
621 msnm., con temperatura media de 26,2oC y precipitación
media anual de 966 mm. En ambas localidades se notó abundancia de
quiripiti (Clusia minor) y copey (Clusia major), plantas
muy productoras de resinas, señaladas por Salamanca (2005) como una de
las principales fuentes que las abejas convierten en propóleos en las
regiones tropicales.
En cada región la
recolección del propóleos, proveniente de 10 colmenas, fue realizada
cada 14 días, mediante el raspado del propóleos acumulado en la
entretapa y en las alzas, realizándose un pool de las muestras por cada
mes evaluado. En total, se tomaron 12 muestras en la zona de la Cortada
del Guayabo y seis muestras en la zona de Guatire.
La preparación de los
Extractos Etanólicos de Propóleos (EEP) se realizó según la
metodología descrita por Park et al. (1998). Se prepararon dos
EEP por cada muestra mensual recolectada. Los EEP tenían una
concentración de 15 mg/ml.
Se realizaron
antibiogramas con líneas estandarizadas American Type Culture
Collection (ATCC) de Staphylococcus aureus ATCC 25.923 y Micrococcus
luteus ATCC 9.341 como bacterias de prueba. Se prepararon dos placas
de petri, con sus respectivas réplicas, con agar Müeller-Hinton y
suspensión de 108 a 109 de M. luteus ATCC
9.341 y S. aureus ATCC 25.923, sometidas a la acción de los
diferentes EEP de cada muestra recolectada, a través de discos (uno por
cada muestra de propóleos) de papel de 5 mm de diámetro. Como control
fue usado un disco impregnado de alcohol etílico al 70%. Después las
placas fueron incubadas a 370C durante 24 horas.
Posteriormente, fueron leídos los halos de inhibición de crecimiento
de las bacterias en mm, usando una regla milimetrada. La presencia de
halo de inhibición indicaba que las bacterias evaluadas eran sensibles
y la ausencia del mismo indicaba que resistente al EEP evaluado.
Para el análisis de
los datos, se empleó un modelo mixto basado en mediciones repetidas en
el tiempo, en cada localidad estudiada. Posteriormente se aplicó la
prueba de media de la mínima diferencia significativa honesta de Tukey
a un nivel de P = 0,05 por medio del programa Infostat (2002). El modelo
usado fue:
Yij: m
+ µ i + a iγk+ βj+
a iβj +a iβjγk
Donde:
Yij =
Valor estimado de la característica de inhibición
m = Media de la
población
a i =
Efecto aleatorio de la i-ésima colonia
a iγk = Efecto aleatorio de la i-ésima colonia en k-ésima muestra
βj = Efecto aleatorio del j-ésimo mes
a iβj = Efecto aleatorio de la i-ésima colonia en el j-ésimo mes
a iβjγk = Efecto aleatorio de la i-ésima colonia en el j-ésimo mes de la
k-ésima muestra.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados de la
actividad antimicrobiana de los EEP provenientes de los apiarios del
bosque seco tropical del estado Miranda son presentados en el Cuadro 1.
Hubo diferencias altamente significativas en cuanto a la influencia
estacional de los EEP en la inhibición del crecimiento del M. luteus ATCC 9.341, observándose que la muestra de EEP de enero
presentó la mayor inhibición, al presentar halo superior a 20 mm.
Similarmente, el S. aureus ATCC 25.923 fue inhibido por
todos los EEP y mas fuertemente por el EEP de los meses de enero, siendo
estos valores superiores a los reportados por Konishi et al. (2004) con S. aureus y Streptococcus mutans, con halos de
inhibición entre 7,9 y 12,0 mm. A través de la prueba de Tukey
(P<0,05) se evidenció que el S. aureus fue más sensible a
los EEP al mostrar los mayores diámetros de inhibición que el M.
luteus, concordando con los resultados reportados por Bracho et
al. (1999) y Moura et al. (1999a).
Cuadro
1. Actividad antimicrobiana de los EEP contra Micrococcus
luteus ATCC 9.341 y Staphylococcus aureus ATCC
25.923 de propóleos del bosque seco tropical del estado Miranda, desde octubre de 2001 a marzo de
2002. |
|
Mes |
Halo de
inhibición
Micrococcus luteus |
Halo de
inhibición
Staphylococcus aureus |
|
mm |
|
Octubre |
15,8 e† |
17,0 d |
Noviembre |
17,3 d |
18,0 c |
Diciembre |
18,3 c |
14,8 e |
Enero |
20,5 a |
25,0 a |
Febrero |
19,3 b |
19,8 b |
Marzo |
15,3 e |
14,0 f |
Promedio |
17,7 |
18,1 |
|
† Valores con
letras distintas ent la fila son diferentes (P<0,05). |
|
En el Cuadro 2 se muestran los
datos sobre la actividad antimicrobiana de los EEP, obtenidos de la zona
de bosque húmedo premontano, donde la influencia estacional mostró
diferencias significativas. Todos los EEP propóleos inhibieron
fuertemente el crecimiento microbiano, tanto del M. luteus como
del S. aureus.
Los EEP obtenidos de
muestra colectadas en lo meses de octubre, enero, julio y septiembre,
presentaron mayor actividad contra el M. luteus, con halos de
inhibición superiores a 25 mm. El S. aureus fue más sensible a
los EEP de octubre, enero y julio, y aunque presentaron una mayor
inhibición, ambas bacterias mostraron mayor sensibilidad ante los EEP
de enero (P<0,05). Similarmente, los EEP de esta región fueron más
efectivos contra el S. aureus que contra el M. luteus (Cuadro 2).
Los resultados de todos
los EEP evaluados muestran que la actividad antimicrobiana del
propóleos es variable dependiendo del microorganismo en estudio y de la
región de colecta del mismo, tal como lo sugiere Koo et al.
(1999), concordando con los resultados de Sforcin (1998), quien no
encontró efecto estacional al evaluar propóleos colectado en cuatro
estaciones, los cuales inhibieron el crecimiento de bacterias
Gram-positivas y Gram-negativas.
Cuadro
2. Actividad antimicrobiana de los EEP contra Micrococcus
luteus ATCC 9.341 y Staphylococcus aureus ATCC
25.923, de propóleos de la Estación Experimental "Jaime
Henao Jaramillo", estado Miranda, Venezuela. De octubre de
2001 a septiembre de 2002. |
|
Mes |
Halo de
inhibición
Micrococcus luteus |
Halo de
inhibición
Staphylococcus aureus |
|
mm |
|
Octubre |
26,0 b† |
27,8 c |
Noviembre |
21,8 f |
19,5 g |
Diciembre |
25,0 c |
24,8 d |
Enero |
27,8 a |
30,0 a |
Febrero |
19,8 h |
24,3 de |
Marzo |
21,0 g |
19,0 g |
Abril |
22,8 e |
25,3 d |
Mayo |
18,8 i |
18,0 h |
Junio |
23,8 d |
22,8 e |
Julio |
27,8 a |
29,3 b |
Agosto |
18,8 i |
20,8 f |
Septiembre |
26,3 b |
25,0 d |
|
Promedio |
23,3 |
23,9 |
|
† Valores con
letras distintas en la fila son diferentes (P<0,05). |
|
Las diferencias
significativas en la actividad antimicrobiana del propóleos,
provenientes del bosque húmedo premontano y colectados en diferentes
meses, pudiera deberse a la composición de las resinas que lo forman,
dado que las abejas extraen resinas, principalmente de los puntos de
crecimiento de las plantas. En las regiones tropicales, aún cuando el
crecimiento de las plantas se manifiesta durante todo el año, quizás
en enero se presentan características especiales, tales como mayor
oscilación de temperatura diaria, una sequía incipiente, pero con
suficiente humedad edáfica, lo que permitiría una mayor secreción de
resinas. De esta manera se presentaría un comportamiento similar al
referido por Ghisalberti (1979), quien señala que las abejas colectan
el propóleos a finales de la primavera, en verano y a principios de
otoño, lo cual se corresponde con el crecimiento y mayor exudado de
resinas en las plantas en dichas regiones. No obstante, Bankova et al.
(1998) estudiaron el efecto estacional sobre la composición química
del propóleos y encontraron que la disminución de algunos componentes
activos, como el ácido fenólico, es acompañado por el incremento de
otros componentes biológicamente activos, como los ácidos terpénicos.
En general, la actividad
antimicrobiana de los propóleos se atribuye al contenido de
flavonoides, tal como lo refieren diversos autores como Lefkovits et
al. (1997), Chaillou et al. (2004) y Principal (2005). Sin
embargo, los propóleos estudiados en el presente ensayo mostraron
valores bajos y medios de flavonoides, variando de 0,55 a 0,97%,
difiriendo de esta aseveración y concordando con los resultados de
Manrique y Santana (2004), quienes trabajaron con propóleos de abejas
sin aguijón que poseen tenores muy bajos de flavonoides y mostraron
halos de inhibición de hasta 25 mm versus S. aureus y M.
luteus.
CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos
muestran que los EEP obtenidos de dos zonas de vida del estado Miranda,
Venezuela poseen actividad antimicrobiana contra Staphylococcus
aureus y Micrococcus luteus.
Hubo influencia
estacional en la actividad antimicrobiana de los propóleos evaluados,
mostrando un mayor halo de inhibición en los EEP provenientes de
muestras colectadas en el mes de enero en ambas localidades.
Los EEP estudiados
pueden ser usados como agentes antimicrobianos contra S. aureus y M. luteus.
El S. aureus mostró
ser más sensible a los EEP evaluados que el M. luteus, en ambas
localidades.
BIBLIOGRAFÍA
- Amoros M., F. Savager, L. Girre y M. Cormier. 1992. In vitro antiviral activity of propolis. Apidologie, 23: 231-240.
- Asís M. 1993. Apiterapia para todos. Como usar los siete productos de la colmena para curar. Editorial Científico-Técnica. La Habana, Cuba. 194 p.
- Bankova V., G. Boudorova-Krasteva, S. Popov, J. Sforcin y S. Funari. 1998. Seasonal variations of the chemical composition of Brazilian propolis. Apidologie, 29: 361-367.
- Bracho J., M. Fernández, G. Iturrioz, R. Mallo, A. Tabera y A. Erpelding. 1999. Preliminary studies of propolis from Argentine. Revista da Universidade de Franca, Edição Especial, I Simpósio Brasileiro de Própolis e Apiterápicos, 7(7): 33.
- Chaillou L.L., H.A. Herrera y J.F. Maidana. 2004. Estudios de propóleos de Santiago del Estero, Argentina. Ciência e Tecnología de Alimentos, 24(1): 11-15.
- Ghisalberti E.L. 1979. Propolis: A review. Bee World, 60(1): 59-84.
- González A.R. y R. Bernal. 1997. Propóleos: Un camino hacia la salud. Ed. Pablo de la Torriente. La Habana, Cuba. 132 p.
- Hegazi A.G. y F. El-Hady. 2002. Egyptian propolis: 3. Antioxidant, antimicrobial activities and chemical composition of propolis from reclaimed lands. Zeitschrift füf Naturforsch [C], 57(3-4): 395-402.
- Infostat. 2002. Software estadístico. Manual del usuario. Versión 1. 266 p.
- Konishi S., A.C.H. Sawaya, A. Custódio, I.B. da S. Cunha y M.T. Shimizu. 2004. Análise da influência de agentes soluilizantes na atividade antimicrobiana de extratos de propolis e de uma formulação de spray hidroalcoólico. Revista Mensagem Doce, 75: 5-8
- Koo H., P. Rosalen, J. Cury, Y. Park y M. Ikegaki. 1999. Avaliação do potencial anti-cárie e anti-placa da própolis de Apis mellifera da região sudeste e sul do Brasil. I. Atividade antimicrobiana in vitro sobre patógenos bucais. Revista da Universidade de Franca (Edição Especial) I Simpósio Brasileiro sobre Própolis e Apiterápicos, 7(7): 48-49.
- Kujumgiev A., I. Tsvetkova, Y. Serkedjieva, V. Bankova, R. Christov y S. Popov. 1999. Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis of different geographic origin. J. Ethnopharm., 64:235-240.
- Lefkovits I., Z.Z. Su y P.B. Fischer. 1997. Caffeic acid phenethyl ester profundly modifies protein synthesis profile in type 5 adenovirus-transformed cloned rat embryo fibroblats cells. Int. J. Oncology, 11(1): 59-67.
- Levy N.C. 1999. Atividade antimicrobiana da própolis. Revista da Universidade de Franca (Edição Especial) I Simpósio Brasileiro de Própolis e Apiterápicos, 7(7): 18.
- Manrique A.J. y R.E. Thimann. 2002. Coffee (Coffea arabica) pollination with africanized honeybees in Venezuela. Interciencia, 27(8): 414-416.
- Manrique A.J. y W.C. Santana. 2004. Antibacterial and antioxidant activities of propolis of native (Brazil and Venezuela) stingless bees (Melipona quadrifasciata Lep., Tetragonisca angustula and Nannotrigona sp.). Proc. 8th IBRA International Conference on Tropical Bees and VI Encontro sobre Abelhas. Ribeirão Preto, Brasil, 710 p. CD-ROM.
- Moura F., M. Ikegaki, S. Alencar, H. Sato e Y. Park. 1999. Classificação da própolis da região sudeste do Brasil. Revista da Universidade de Franca (Edição Especial) I Simpósio Brasileiro sobre Própolis e Apiterápicos, 7(7): 43-44.
- Moura F., M. Ikegaki, S. Alencar, H. Sato e Y. Park. 1999. Abelhas européias vs. abelhas africanizadas: Estudo comparativo de sua própolis. Revista da Universidade de Franca (Edição Especial) I Simpósio Brasileiro sobre própolis e Apiterápicos, 7(7): 44.
- Orsi R.O., J.M. Sforcin, V.L.M. Rall, S.R.C. Funari, L. Barbosa y J.R.A. Fernandes. 2005. Susceptibility profile of Salmonella against the antibacterial activity of propolis produced in two regions of Brazil. J. Venomous Animals and Toxins including Tropical Diseases, 11(2): 109-116
- Park Y.K., M. Ikegaki. y J.A. da Silva Abreu. 1998. Estudo da preparação dos extratos de propolis e suas aplicações. Ciencia e Tecnología de Alimentos, 18(3): 313-318.
- Pereira M.L. 1999. Atividade antibacteriana. Revista da Universidade de Franca, Edição Especial, I Simpósio Brasileiro sobre Própolis e Apiterápicos, 7(7): 20.
- Principal J. 2005. El propóleo: Perspectivas terapéuticas en la medicina humana y veterinaria. Memorias I Congreso Internacional de Apicultores de los Andes y III Convención de Apicultores, San Cristóbal, Táchira, Venezuela. 57- 60 pp.
- Salamanca G. 2005. Propiedades nutricionales y apiterapéuticas de los productos de la colmena. Memorias I Congreso Internacional de Apicultores de los Andes y III Convención de Apicultores, San Cristóbal, Táchira, Venezuela. 5-14 pp.
- Sforcin J.M., A. Fernándes, C.A.M. Lopes, V. Bankova y S.R.C. Funari. 2000. Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity. J. Ethnopharm., 73: 243-249.
- Sforcin J.M., A. Fernándes, C.A.M. Lopes y S.R.C. Funari. 1998. Efeito da sazonalidade sobre a atividade antifúngica da própolis. Anais XII Congresso Brasileiro de Apicultura. Salvador, Bahia, Brasil. 193 p.
- Vargas A. C de, A. P. Loguercio, N. M. Witt, M. M. da Costa, M. Sá e Silva y L.R. Viana. 2004. Atividade antimicrobiana "in vitro" de extrato alcóolico de própolis. Ciencia Rural, 34(1): 159-163.
Copyright 2006 - Zootecnia Tropical.
|