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A MicroELISA for the Quantitation of Mouse Monoclonal IgM in Hybridoma Culture Supernatants Nodarse, Jorge Fraga; Méndez, Juan Carlos Vilaseca; Antúnez, Maritza Pupo & González, Anselmo Otero Abstract A microELISA has been set up which is able to sensitively quantitate mouse monoclonal IgM in hybridoma culture supernatants in a suitable range of concentrations. This assay uses ion exchange chromatography-purified rabbit anti-mouse IgM polyclonal antibodies, both in coating capture step and conjugated to horseradish peroxidase in revealing step. It was possible to detect concanavalin A-Sepharose affinity-purified and gel filtration-highly purified mouse monoclonal IgM in the range 190 ng/mL to 12360 ng/mL (sensitivity 125.5 ng/mL). This assay showed a variation coefficient of 4.50% for intraplate repeatability and 7.50% for interplate reproducibility. When compared with an alternative ELISA test that uses a commercial goat anti-IgM-alkaline phosphatase conjugate a correlation coefficient r = 0.92 was found. With this assay, the quality control program of the authors. hybridoma unit is completed, which was developed with their own resources. Keywords ELISA, IgM, monoclonal antibody, quantitation

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MicroELISA Para la Cuantificación de IgM Monoclonal de Ratón en el Sobrenadante de Cultivos de Hibridomas Nodarse, Jorge Fraga; Méndez, Juan Carlos Vilaseca; Antúnez, Maritza Pupo & González, Anselmo Otero Resumen Se optimizó un ensayo ELISA que es capaz de cuantificar IgM monoclonal de ratón con gran sensibilidad en el sobrenadante de cultivos de hibridomas en un rango apropiado de concentraciones. Este ensayo utiliza anticuerpos policlonales anti-IgM de ratón generados en conejo y purificados por cromatografía de intercambio iónico. Estos anticuerpos son utilizados como recubrimiento y conjugados con peroxidasa de rábano picante. El ensayo detectó IgM monoclonal de ratón purificada mediante cromatografía de afinidad con concanavalina A-Sefarosa, y mediante filtración en gel, en un rango de cuantificación de 190 ng/mL a 12360 ng/mL (sensibilidad 125,5 ng/mL). Este ensayo mostró repetibilidad intraplaca con un coeficiente de variación (CV) de 4,50% y una reproducibilidad interplaca con un CV de 7,50%. Cuando se comparó con un sistema similar que utilizó el conjugado comercial anti-IgM de ratón-fosfatasa alcalina, se obtuvo un coeficiente r = 0,92. Con este ensayo, se completa un programa de control de la calidad de la unidad de hibridomas de los autores de este trabajo, desarrollada con sus propios recursos. Palabras-clave anticuerpo monoclonal, cuantificación, ELISA, IgM

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