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Biotecnologia Aplicada
Elfos Scientiae
ISSN: 0684-4551
Vol. 17, No. 3, 2000, pp. 183-186
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Bioline Code: ba00053
Full paper language: English
Document type: Research Article
Document available free of charge
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Biotecnologia Aplicada, Vol. 17, No. 3, 2000, pp. 183-186
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Validación de un ELISA Para la Cuantificación de Anticuerpos Antitoxina Diftérica en Sueros Humanos
Rodríguez, Juan C. Martínez; Azze, Rolando Ochoa; Perón, Argentina Cruces; Fajardo, Esther M.; Figueredo, Eduardo Álvarez; Marchena, Xenia Ferriol; González, Eric A. Estrada & Padrón, Franklin Sotolongo
Resumen
Se desarrolló un ensayo inmunoenzimático en fase sólida (ELISA) de tipo indirecto para la cuantificación de antitoxina diftérica en sueros humanos, con el empleo de un estándar previamente calibrado. Las imprecisiones intra e interensayo fueron de alrededor de 10%. Este ensayo también mostró una excelente precisión (recobrado medio de 97,06%). Las desviaciones del paralelismo estuvieron por debajo de 10%, las cuales se evaluaron con el empleo de diluciones que cubrían el intervalo de trabajo de la curva estándar. El límite de detección de 0,0044 unidades internacionales por mililitro (UI/mL) fue suficiente para determinar el grado de protección inmunológica contra la difteria. En un estudio preliminar, el ensayo mostró una correlación adecuada con la prueba de neutralización en conejillos de Indias (R2 = 0,992). Este inmunoensayo ofrece, además, un amplio intervalo de cuantificación, lo que permitió la clasificación de 81 individuos adultos antes y cuatro semanas después de la revacunación como: desprotegidos (0,01 UI/mL), relativamente protegidos (> 0,01-0,1 UI/mL), satisfactoriamente protegidos (> 0,1-1,0 UI/mL) y protegidos por largo tiempo (> 1,0 UI/mL).
Palabras-clave
antitoxina diftérica, ELISA, validación
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Validation of an ELISA for the Quantitation of Diphtheria Antitoxin in Human Serum
Rodríguez, Juan C. Martínez; Azze, Rolando Ochoa; Perón, Argentina Cruces; Fajardo, Esther M.; Figueredo, Eduardo Álvarez; Marchena, Xenia Ferriol; González, Eric A. Estrada & Padrón, Franklin Sotolongo
Abstract
An indirect solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for the quantitation of antidiphtheria antibodies in human sera on the basis of a calibrated antibody standard. Intra- and inter-assay imprecision was around 10%. This assay showed an excellent accuracy (97.06% average recovery). Parallelism deviations were below 10%, which were evaluated with dilutions covering the working range of the standard curve. The detection limit of 0.0044 international units per milliliter (IU/mL) was sufficient for determining the immunological protection against diphtheria. In a preliminary study, a good correlation was found between the ELISA and the neutralization test in guinea pigs (R2 = 0.992). A wide range of diphtheria antitoxin quantitation made possible to classify 81 adults prior and four weeks after revaccination against diphtheria as: unprotected subjects (0.01 U/mL), relatively protected (> 0.01-0.1 IU/mL), satisfactorily protected (> 0.1-1.0 IU/mL), and long-lasting protected (>1.0 IU/mL).
Keywords
diphtheria antitoxin, ELISA, validation
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