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Epidermal growth factor stimulated re-epithelialization in pigs. The possible role of acute-wound proteases Berlanga, Jorge; Lodos, Jorge; Reyes, Osvaldo; Infante, Juan F.; Caballero, Enrique & López-Saura, Pedro Abstract The epithelial response to a daily topical treatment regime with three different epidermal growth factor (EGF) concentrations was evaluated in five pigs. Animals were kept under controlled environmental conditions, and 30 partial-thickness wounds were inflicted on the dorsum. These were assigned to treatments with 50, 10 and 2 μg of human reacombinant EGF (hr-EGF/g). Control wounds received cream vehicle or were untreated. Wounds were cleansed, inspected and treated every day accordingly. The wound-derived exudate was collected from the untreated wounds during the first 24 h post-injury, and filter-sterilized to qualitatively estimate the presence of protease activity on a fluorescent synthetic peptide by electrophoresis. After 7 EGF treatments, pigs were sacrificed on day 8 and the wounds were harvested and processed to determine the percentage of total re-epithelialization, average radius, and wound perimeter, as the linear ingrowth. The computerized morphometric study proved that only the largest dose significantly stimulated re-epithelialization, whereas the other doses were ineffective. It was also shown that the acute phase-wounds exudate exhibits proteolytic activity which completely degraded the fluorescent substrate. This proteolytic activity was similarly inhibited by 0.5 and 5 μg of a Kunitz-type protease inhibitor. Our results lead us to speculate that the bioavailability of topically applied EGF to accelerate wound healing may be reduced by proteases derived from local acute wounds. Keywords wound healing, EGF, re-epithelialization

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Berlanga, Jorge; Lodos, Jorge; Reyes, Osvaldo; Infante, Juan F.; Caballero, Enrique & López-Saura, Pedro Resumen Se estudió el efecto de la aplicación tópica de tres concentraciones de factor de crecimiento epidérmico (FCE) sobre la respuesta epitelial en cinco cerdos. Los animales se mantuvieron en condiciones controladas, induciéndose 30 heridas de grosor parcial en la región del dorso. Un número similar de heridas en cada animal fue asignado a tratamiento con 50, 10 o 2 μg de FCE humano recombinante (FCE-hr/g) de vehículo. Los controles consistieron en heridas tratadas con el vehículo o libres de tratamiento. Las heridas fueron inspeccionadas, higienizadas, y medicadas diariamente según correspondió, sin practicar escarectomía. El exudado de las heridas control no tratadas fue cuidadosamente colectado durante las primeras 24 h post-lesión y esterilizado para determinar la presencia de proteasas sobre un sustrato fluorescente mediante ensayo cualitativo. Luego de siete tratamientos los animales se sacrificaron, y se colectaron las heridas para determinación morfométrica de: porciento del área epitelizada, radio medio, perímetro y crecimiento lineal. Sorpresivamente se constató que sólo la dosis de 50 μg estimuló significativamente la regeneración epitelial, en tanto que las otras resultaron inefectivas. Paralelamente observamos la presencia de actividad de proteinasas en el exudado estéril de heridas en fase aguda, la que fue inhibida por 0,5 y 5 μg del inhibidor ensayado. Estos resultados sugieren indirectamente que el FCE aplicado sobre lesiones no contaminadas en fase aguda puede ser potencialmente degradado, lo que puede limitar su potencia biológica, biodisponibilidad y efectividad clínica.g del inhibidor ensayado. Estos resultados sugieren indirectamente que el FCE aplicado sobre lesiones no contaminadas en fase aguda puede ser potencialmente degradado, lo que puede limitar su potencia biológica, biodisponibilidad y efectividad clínica. Palabras-clave cicatrización, FCE, reepitelización

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