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Biotecnologia Aplicada
Elfos Scientiae
ISSN: 0684-4551
Vol. 15, No. 3, 1998
Bioline Code: ba98030
Full paper language: English
Document type: Research Article
Document available free of charge

Biotecnologia Aplicada, Vol. 15, No. 3, 1998

 en Expresión por ingeniería genética de la fimbria K99 de Escherichia coli enterotoxigénica en diferentes cepas de E. coli K12

Abstract

Biotecnología Aplicada 1998;15:183-187

Expresión por ingeniería genética de la fimbria K99 de Escherichia coli enterotoxigénica en diferentes cepas de E. coli K12

Ángela E Sosa, Roberto Basulto, José A Ramón y José de la Fuente

Code Number: BA98030
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ABSTRACT

The fimbriae is used for immunization of lambs, pigs and calves, against gastrointestinal infection with Escherichia coli K99. Due to low expression levels of fimbriae in natural strains, it is attractive its obtainment by recombinant technology. However, it is difficult to achieve a stable expression in E. coli K12, because of the lisis and the plasmid unstableness which provoke the accumulation of the proteins that constitute the fimbriae inside a bacterium. We previously reported the cloning of the gene fanC on the plasmid pUC19. In this work, we report the cloning of the complete operon under its own regulating region on the plasmid pUC19. This genetic construction was evaluated in 14 strains of E. coli K12, and several differences were found in terms of: the efficiency of transformation, growth and levels of expression of fimbriae (determined by a specific ELISA) in the Luria-Bertani, minimum and saline media. We also evidenced that the presence of the genotype D (ara-leu) favored the expression of fimbriae. These observations permitted us to adequately select the host, which is an important step in the large-scale expression of recombinant fimbriae.

Keywords: fimbriae, pili, K99, enterotoxigenic E. coli

RESUMEN

La fimbria se utiliza para la inmunización de corderos, cerdos y terneros contra la infección gastrointestinal de Escherichia coli K99. Debido a los bajos niveles de expresión de fimbria a partir de cepas naturales es atractiva su obtención por vía recombinante. Sin embargo, es difícil lograr una expresión estable en cepas de E. coli K12, por la lisis celular y la inestabilidad plasmídica que provoca la acumulación de las proteínas que constituyen la fimbria en el interior de la bacteria. Previamente se reportó el clonaje del gen fanC en el plásmido pUC19. En este trabajo se reporta el clonaje del operón bajo su propia región reguladora en el plásmido pUC19. Esta construcción genética se evaluó en 14 cepas de E. coli K12 y se encontraron diferencias en cuanto a: la eficiencia de transformación, crecimiento y niveles de expresión de fimbria (determinada por un ELISA específico) en los medios Luria-Bertani, mínimo y salino. También se evidenció que la presencia de un genotipo D (ara-leu) donde se deleciona el operón leu completo favoreció la expresión. Estas observaciones permitieron hacer una selección adecuada del hospedero, paso importante para la expresión de fimbria recombinante a gran escala.

Palabras claves: fimbria, pili, K99, E. coli enterotoxigénica

Copyright 1998 Elfos Scientiae

 

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