Biotecnología Aplicada 1998;15:183-187
Expresión por ingeniería genética de la fimbria K99 de
Escherichia coli enterotoxigénica en diferentes cepas de
E. coli K12
Ángela E Sosa, Roberto Basulto, José A Ramón y
José de la Fuente
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ABSTRACT
The fimbriae is used for immunization of lambs, pigs and calves,
against gastrointestinal infection with Escherichia coli K99. Due to
low expression levels of fimbriae in natural strains, it is attractive its
obtainment by recombinant technology. However, it is difficult to achieve a
stable expression in E. coli K12, because of the lisis and the
plasmid unstableness which provoke the accumulation of the proteins that
constitute the fimbriae inside a bacterium. We previously reported the
cloning of the gene fanC on the plasmid pUC19. In this work, we
report the cloning of the complete operon under its own regulating region
on the plasmid pUC19. This genetic construction was evaluated in 14 strains
of E. coli K12, and several differences were found in terms of: the
efficiency of transformation, growth and levels of expression of fimbriae
(determined by a specific ELISA) in the Luria-Bertani, minimum and saline
media. We also evidenced that the presence of the genotype D (ara-leu) favored the expression of fimbriae.
These observations permitted us to adequately select the host, which is an
important step in the large-scale expression of recombinant
fimbriae.
Keywords: fimbriae, pili, K99, enterotoxigenic E. coli
RESUMEN
La fimbria se utiliza para la inmunización de corderos,
cerdos y terneros contra la infección gastrointestinal de
Escherichia coli K99. Debido a los bajos niveles de expresión
de fimbria a partir de cepas naturales es atractiva su obtención por
vía recombinante. Sin embargo, es difícil lograr una
expresión estable en cepas de E. coli K12, por
la lisis celular y la inestabilidad plasmídica que provoca la
acumulación de las proteínas que constituyen la fimbria en el
interior de la bacteria. Previamente se reportó el clonaje del gen
fanC en el plásmido pUC19. En este trabajo se reporta el
clonaje del operón bajo su propia región reguladora en el
plásmido pUC19. Esta construcción genética se
evaluó en 14 cepas de E. coli K12 y se encontraron
diferencias en cuanto a: la eficiencia de transformación,
crecimiento y niveles de expresión de fimbria (determinada por un
ELISA específico) en los medios Luria-Bertani, mínimo y
salino. También se evidenció que la presencia de un genotipo
D (ara-leu) donde se deleciona el
operón leu completo favoreció la expresión.
Estas observaciones permitieron hacer una selección adecuada del
hospedero, paso importante para la expresión de fimbria recombinante
a gran escala.
Palabras claves: fimbria, pili, K99, E. coli
enterotoxigénica
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