Biotecnologia Aplicada 1999; Vol. 16 No. 3, pp. 145-148
Production of Recombinant Treponema
pallidum Membrane Protein A in Escherichia coli Using
Fed-batch Fermentation
Juan M Rivera, María del Carmen
Domínguez, Maira Ponce, Ramón E Narciandi
Code Number: BA99024
ABSTRACT
There is special interest on the 42-kDa Treponema
pallidum membrane protein A (TmpA) due to its potential use for
syphilis serological assay. Different genetic constructions and
cloning in bacteria of recombinant DNA containing the synthetic
TmpA gene have been reported, but in all cases the expression
levels and fermentation productivity have been affected by
different factors and, on the other hand, its purification has
involved a series of laborious steps. A fed-batch culture of
Escherichia coli W3110 capable of achieving high expression
levels (36%) and high production yields (1.74 g/L) of recombinant
TmpA was developed using the expression vector pR2M6. Different
host strains and induction conditions were studied in order to
maximize protein expression. In this study, a rapid and simple
procedure for the purification of recombinant TmpA to over 85% of
purity and about 60% of recovery is reported using immobilized
metal ion affinity chromatography.
Keywords: Escherichia coli, fed-batch
fermentation, recombinant protein, TmpA
RESUMEN
La proteína de membrana A de 42 kDa de Treponema
pallidum (TmpA) es de especial interés debido a sus
potencialidades para el diagnóstico serológico de la
sífilis. Se han reportado diferentes construcciones
genéticas y la clonación en bacterias de fragmentos
de ADN que contienen el gen sintético de TmpA. Sin embargo,
en todos los casos los niveles de expresión y la
productividad de la fermentación han estado afectados por
diferentes factores y, por otro lado, la purificación se ha
realizado mediante pasos complejos. Para resolver estos
inconvenientes, se desarrolló un cultivo incrementado de
Escherichia coli W3110 que permite obtener altos niveles de
expresión (36%) y un rendimiento elevado (1,74 g/L) de TmpA
recombinante mediante la utilización del vector de
expresión pR2M6. Se estudiaron diferentes cepas y
condiciones de inducción con el objetivo de maximizar los
niveles de expresión de la proteína. En este trabajo
se reporta un procedimiento rápido y sencillo para la
purificación de TmpA recombinante con más de 85% de
pureza y alrededor de 60% de recobrado, mediante
cromatografía de de afinidad por iones metálicos.
Palabras claves: cultivo incrementado, Escherichia
coli, proteína recombinante, TmpA
Copyright 1999 Elfos Scientiae
