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TECHNICAL NOTE - Determination of saxitoxin and its derivatives in mollusk bivalves: Evaluation and optimization of the high performance liquid chromatographic use with fluorescence detection and prior oxidation Luisa Rojas de Astudillo, Iván Chang-Yen, Amelia La Barbera-Sánchez Abstract Saxitoxin and its derivatives are potent neurotoxins associated with paralytic shellfish poisoning (PSP) in humans which are primarily produced by dinoflagellates. To evaluate and optimize the use of high performance liquid chromatography (HPLC) with previous oxidation in order to determine saxitoxin and its derivatives, samples of the green mussel ( Perna viridis ) and oysters ( Crassostrea sp) were collected at six locations in Venezuela and at four in Trinidad, the latter along the west coast line, in June 2000. The samples were extracted using the AOAC bioassay mouse procedure. Each extract was oxidized using periodic acid and the oxidation product was injected to the chromatographic column. The method used to HPLC in this work was a modification of Lawrence et al. (1996). The separation of important pairs of toxins (STX/NEO, GTX1,4/GTX2,3) were achieved, but the resolution and height of the peaks of oxidation products of these toxins varied depending on column efficiencies. Some samples had presence of PSP below permissible levels, which was confirmed by using bioassay mouse method. The results showed that the reaction precolumn method gives prompt information about profile of the toxins, which is independent of matrix of receptor organism, and it is a simple method for monitoring PSP in shellfish in the Caribbean. Keywords saxitoxin, PSP, neurotoxin, dinoflagellate, toxic

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NOTA TÉCNICA - Determinación de saxitoxina y sus derivados en moluscos bivalvos: Evaluación y optimización del uso de cromatografía líquida de alta resolución con previa oxidación Luisa Rojas de Astudillo, Iván Chang-Yen, Amelia La Barbera-Sánchez Resumen La saxitoxina y sus derivados son potentes neurotoxinas que originan afecciones asociadas a la intoxicación paralizante en humanos (PSP, siglas en inglés) que son producidas primariamente por dinoflagelados. Con la finalidad de evaluar y optimizar el uso de la cromatografía líquida de alta resolución con previa oxidación para la determinación de la saxitoxina y sus derivados se tomaron muestras de mejillones verdes ( Perna viridis ) y ostras ( Crassostrea sp) en seis localidades de Venezuela y cuatro de Trinidad, de éste último a lo largo de la costa occidental, durante el mes de junio del 2000. Las muestras fueron extraídas siguiendo el procedimiento AOAC usado para el bioensayo de ratón. Cada extracto fue oxidado usando ácido peryódico y el producto de oxidación inyectado a la columna cromatográfica. El método utilizado para la cromatografía líquida de alta resolución con detector de fluorescencia correspondió a una modificación del sugerido por Lawrence et al. (1996). Se logró la separación de importantes pares de toxinas (STX/NEO, GTX1,4/GTX2,3), pero la resolución y la altura de los picos de los productos de oxidación de esas toxinas variaron dependiendo de la eficiencia de las columnas utilizadas. Algunas muestras presentaron contaminación por PSP, pero las concentraciones estuvieron por debajo de los límites permisibles, las cuales fueron confirmadas por el método de bioensayo del ratón. Los resultados demuestran que el método de reacción precolumna provee una información rápida acerca de la composición de las toxinas, independiente de la matriz del organismo receptor y es un método simplificado para el monitoreo de PSP en moluscos en el Caribe. Palabras-clave Saxitoxina, PSP, neurotoxina, dinoflagelados, tóxicos.

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